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ELISA實驗的過程常見問題
閱讀：798 發(fā)布時間：2014-6-27 大家在做ELISA實驗的過程中，難免會遇到各種不同的問題，比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽性，實驗的重復(fù)性不好等等。現(xiàn)在上海勁馬生物科技有限公司就來一一解答用戶們在實驗過程中遇到的各種疑問！
曲線問題：
1.OD值不正常 | 試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃ |
溫度控制不好，控制正確溫度 | |
孵育時間不準(zhǔn)確，控制孵育時間 | |
洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干 | |
陽光直射，對著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避 | |
酶標(biāo)儀的波長錯誤，酶標(biāo)儀的波長450nm | |
抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體 | |
水質(zhì)問題，用娃哈哈礦泉水代替 | |
2.白 板 | 洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液 |
少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體 | |
3.無 梯 度 | 標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板 |
| OD值不正常，控制溫度時間在做一次 |
| 人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板 |
4.線 性 不 好 | OD值不正常，控制溫度時間在做一次 |
回收率 | |
1.空白管陽性高 | 樣本本身就是陽性樣本，換陰性樣本做回收率 |
空白管在實驗中被污染，實驗中防止交叉污染 | |
水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替 | |
2.偏 高 | 添加量不準(zhǔn)確，的添加量 |
| 添加濃度不適合，添加合適的濃度 |
| 取液吹干量多，準(zhǔn)確的取液吹干 |
| 取到其它相層液體，取需用相吹干 |
| 復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液 |
3.偏 低 | 添加量不準(zhǔn)確，的添加量 |
添加濃度不適合，添加合適的濃度 | |
取液吹干量少，準(zhǔn)確的取液吹干 | |
復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復(fù)溶液 | |
假陰、陽性 |
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1，水質(zhì)原因：點(diǎn)復(fù)溶液驗證，用娃哈哈礦泉水代替 | |
2，實驗操作原因 | 吸取到其它相吹干，準(zhǔn)確的取液吹干 |
離心不*，延長離心時間 | |
樣本的污染，更換樣本 | |
乳化未處理*，溫浴（70℃）處理乳化現(xiàn)象 | |
3，儀器試劑原因 | 離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具 |
有機(jī)溶劑的影響，做試劑空白看影響結(jié)果 | |
4，衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑 | |
5，與曲線好壞相關(guān),，保證曲線的正常 | |
上海恒遠(yuǎn)生物專業(yè)代理銷售各種ELISA試劑盒，客戶在使用過程中，提供售前售中售后全程技術(shù)指導(dǎo)，產(chǎn)品有質(zhì)量問題，免費(fèi)包退換，歡迎大家！