精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當(dāng)前位置:
上海恒遠生物科技有限公司>公司動態(tài)>細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

公司動態(tài)

細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

閱讀:706          發(fā)布時間:2016-9-1

    細胞凋亡發(fā)生時,內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu),可通過檢測核小體判斷細胞是否經(jīng)歷凋亡事件。

(一) 原理

細胞凋亡的發(fā)生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp~200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測細胞溶解物中的核小體片段。

(二)材料與試劑

1.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒,生物標(biāo)記的小鼠抗組蛋白單克隆抗

體。

2.過氧化物酶(-POD)標(biāo)記的小鼠抗DNA單克隆抗體

3.鏈霉親合素包被的微孔板

4.DNA-組蛋白復(fù)合物,作為陰性對照。

5.ABTS底物

6.溶解緩沖液

7.溫育緩沖液

8.底物緩沖液

(三)樣品

1.培養(yǎng)細胞或離體細胞的裂解物細胞裂解步驟:收集細胞,離心后,用200µl溶細胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。

2.培養(yǎng)細胞的上清液

3.血漿(血清)

(四)操作方法

1.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。

2.另加入80µl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD、抗組蛋白-生物素及溫育緩沖液(按1︰1︰18混合),室溫下孵育2h(置搖床上,250r/min)。

3.取上清,用300µl溫育緩沖液洗滌3次,小心移去洗滌液。

4.加入100µl底物緩沖液,室溫下孵育使顏色變化至適合(置搖床上)。

5.盡快作比色分析(10min~20min內(nèi)),用底物緩沖液作空白對照,以波長405nm,參考波長492nm進行檢測。

(五)結(jié)果判定

按下列公式計算細胞釋放的單/低聚核小體片段的特別聚集值:

注:mU=吸收值(10-3)=雙孔吸收值的平均OD值-底物OD值,若樣品的吸收值超過比色測定范圍,應(yīng)適當(dāng)稀釋后再檢測。

小結(jié):這里總結(jié)了ELISA法檢測細胞凋亡實驗原理、試劑配制、操作步驟,希望對大家有用呢,有不當(dāng)?shù)牡胤剑€望指正。細胞凋亡檢測更多詳情,可點擊查看

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~

對比框

產(chǎn)品對比 產(chǎn)品對比 聯(lián)系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪
13636351217
在線留言
主站蜘蛛池模板: 内射白浆一区二区在线观| 国产91福利无码一区在线| 日本小视频天堂久久| 国产又大又硬又粗| 天天日天天操天天干 久久人手机在线 | 91精品国产高清久久久久久伦理片电影免费在线 | 亚洲欧美一区二区三区久本道| 国产最新免费高清在线视频| 97综合视频| 国产精品理论在线无码| 成人性生交A片免费看麻豆| 久久亚洲av无码观看| 日韩亚洲自拍黄色在线免费| 日本一区二区三区在线观看网站| 成人爽a毛片免费视频| 日韩欧美不卡一二三区| 精品AV一区二区五区| 国产私拍精品福利| 亚洲色丰满少妇高潮18p| 2024色情在线无码| 日本一本高清中文字幕视频| 国产日韩精品久久久一区二区| 另类天堂| 免费永久观看美女视频网站网址 | 国产精品成人观看视频免费| 国产日韩末满十八禁止观看| 制服丝袜亚洲中文综合| 成人精品天堂一区二区三区| 人妻夜夜爽天天爽三区麻豆av| 久久久精品久久| 国精品无码一区二区三区免费视频| 中文字幕欧美人妻精品一区 | 内射视频在线播放| 男女羞羞无遮掩视频免费网站| 亚洲午夜精品无码专区在线观看| 久久国产一区二区三| 精品亚洲人人| 欧美成人a在线一区二区| 2024免费人妻在线视频| 久久中文精品视频| 麻豆国产自制在线观看|