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上海恒遠細說ELISA實驗之競爭法
閱讀：1279 發(fā)布時間：2017-7-25ELISA試劑盒由于其操作簡便，靈敏度高，是蛋白檢測技術中應用zui廣泛的技術之一。用ELISA試劑盒實驗的方法有很多種，今天為大家講解ELISA實驗之競爭法!
競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成反比。操作步驟如下：
(1)將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
(2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無 抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與固相抗體的結合可達zui充分的量。洗滌。
(3)加底物顯色：參考管中由于結合的酶標抗原zui多，故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。
Elisa間接法、競爭法、捕獲法，應用親和素和生物素的ELISA
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素。生物素又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物，生物素-羥 基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經(jīng)結合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來，就可大大提高ELISA的敏感度。
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