Occludin,人緊密連接蛋白酶聯免疫試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人緊密連接蛋白（Occludin）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

 實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人緊密連接蛋白（Occludin）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人緊密連接蛋白（Occludin）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

Occludin,人緊密連接蛋白酶聯免疫試劑盒原理操作流程（具體請參照說明書）

① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值

常見問題

實驗中zui可能出現問題       

一、所有孔未顯色？

分析原因：      

1、微孔加入抗體后，洗板不*，微孔中存在游離的抗體。          

2、用錯試劑。          

3、在操作中忘記加酶或抗體。     

 解決辦法：            

1、檢查洗板器械，比如洗板機管道是否堵塞、洗液是否用完。          

2、在加樣前，要看清瓶簽。          

3、嚴格按說明書操作步驟進行實驗，確保每步都到位。          

二、所有孔顯色偏低？

分析原因：    

1、微孔加入抗體后，洗板不*，微孔中存在游離的抗體。          

2、洗板不干凈。          

3、抗體污染了酶結合物等其它試劑。          

4、溫度沒達到要求。          

5、每孔加入的試劑量低于說明書要求量。      

解決辦法：     

1、手工加蒸餾水洗板時，要避免吸頭接觸微孔，常更換新的蒸餾水。    

2、洗板時要確保每孔都注滿蒸餾水（約400ul），且至少洗板五次。      

3、嚴格按說明書要求操作，每次取樣要更換吸頭。      

4、控制孵育溫度在25℃。       

5、加樣器吸頭安放牢固避免吸樣不足，加樣時務必將吸頭內液體打盡。

儲存方式

試劑盒在4℃下存放不要凍結,4℃保存，有效期六個月，客戶應要求供應商，提供批次試劑盒