CLDN5,人緊密連接蛋白5酶聯免疫試劑盒原理

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人緊密連接蛋白5（CLDN5）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人緊密連接蛋白5（CLDN5）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人緊密連接蛋白5（CLDN5）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

CLDN5,人緊密連接蛋白5酶聯免疫試劑盒原理實驗標本采集必修課：
1）標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2）血清：使用不含熱原的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
3）血漿：3000轉離心30分鐘取上清。
4）細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
5）組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎，3000轉離心10分鐘取上清。
6）保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

常見問題解析：

1.加樣量不*？

解決方法：樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。

2.樣品數量多少不一，加樣時間有長有短？

解決方法：重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近。

3.保溫時間不*，洗滌條件不*，操作人員不*？

解決方法：重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性。

ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。

應用領域：

1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。

2、研究抗酶抗體的合成。

3、顯現微量的免疫沉淀反應。

4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。

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