詳細(xì)介紹
小鼠透明質(zhì)酸酶(HAase)酶聯(lián)免疫試劑盒
l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠透明質(zhì)酸酶(HAase)的含量。
l 有效期:6個(gè)月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠透明質(zhì)酸酶(HAase)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠透明質(zhì)酸酶(HAase)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
小鼠透明質(zhì)酸酶(HAase)酶聯(lián)免疫試劑盒需要但未提供的材料
1. 可在450nm處進(jìn)行讀數(shù)的酶標(biāo)儀;
2. 能精確吸取10-200µL的移液器;
3. 可調(diào)多道(8)移液器(50-200µL);
4. 供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽;
5. 洗瓶或洗板機(jī);
6. 蒸餾水或去離子水;
7. 1升的圓柱形量筒;
8. 移液器:1和(10或25 mL);
9. 移液器槍頭;
10. 紙巾;
11. 計(jì)時(shí)器,用以監(jiān)控溫育步驟;
12. 處理池和消毒劑(例如:0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水);
注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室
溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中
不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
保存: 貯藏于2-8°C。
標(biāo)本收集
1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織液標(biāo)本。
2. 室溫(20-25℃)下保存標(biāo)本不要超過(guò)8小時(shí)。2-10℃保存標(biāo)本,不超過(guò)48小時(shí)。如
耽擱的時(shí)間更長(zhǎng),請(qǐng)?jiān)?20℃或更低的溫度下保存標(biāo)本。標(biāo)本避免多次凍融,這樣可能會(huì)損失蛋白活性,產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
準(zhǔn)備工作
1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。
操作步驟
試劑盒應(yīng)平衡至室溫(20-25°C )再試驗(yàn)。 取出所需反應(yīng)板。
1. 加入10ul標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)、10ul標(biāo)本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒,封
住板孔,室溫溫育 45分鐘。
3. 洗板:甩盡板內(nèi)液體,用洗滌液洗滌反應(yīng)板(每孔內(nèi)加入350ul洗滌液),并去除水滴
(在厚疊吸水紙上拍干);反復(fù)洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫溫育20分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液(Stop Solution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD
值。
以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。