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產品簡介
上海恒遠公司歡迎你“大鼠嗜酸粒細胞趨化因子試劑盒"，該試劑盒適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本，靈敏度*。公司產品現貨供應，免費提供代測服務。
詳細介紹
大鼠嗜酸粒細胞趨化因子試劑盒 大鼠ECF 大鼠elisa試劑盒
產品名稱：大鼠嗜酸粒細胞趨化因子試劑盒
各種種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標本齊全：血清、血漿、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液、關節液、胸腔溢液等…
檢測方法：酶聯免疫法/酶免法（ELISA）
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠Ferritin單抗包被于酶標板上，實驗時標本或標準品中的Ferritin會與單抗結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Ferritin抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗小鼠Ferritin抗體與結合在單抗上的小鼠Ferritin結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現藍色，加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值，Ferritin濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線求出標本中Ferritin的濃度。
標本收集:
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內于 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。
3. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
4. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。
5. 標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融，1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。
6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數）。
試驗所需自備物品:
1. 酶標儀（450nm波長濾光片）
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3. 37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
檢測前準備工作:
1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象，可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應為室溫。
3. 標準品: 加入標準品&標本稀釋液1.0ml至凍干標準品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為5000 pg/ml）。然后根據需要進行倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制100-5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制 100-200μl。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。
洗滌方法:
1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1、 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2、 棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內配制），酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。
3、 棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。
4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。
5、 棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止）。
7、 每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。
9、 實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。
實驗操作注意事項：
1、 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊或旋緊以防止蒸發和微生物的污染，否則可能會出現錯誤的結果。
2、 酶標板：剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
3、 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。每次的加樣時間控制在10分鐘內。推薦設置復孔實驗。
4、 溫育：為防止樣品蒸發，實驗時必須給酶標板覆膜；洗板后應盡快進行下步操作，避免酶標板處于干燥狀態；嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
5、 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水。在讀數前要注意清除孔底殘留的液體和手指印，以免影響酶標儀讀數。
6、 試劑配制：Detection Ab及HRP Conjugate體積較小，運輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前請手甩幾下或1000轉/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標準品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液請依據所需的量配制使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Detection Ab時，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液。若需要分次使用標準品應按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復凍融。
7、 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請提前加入終止液終止反應，避免顏色過深影響酶標儀讀數。
8、 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
9、 混勻：充分輕微混勻對反應結果尤為重要，使用微量振蕩器（使用zui低頻率），如無微 量振蕩器，可在反應前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。
10、 安全：試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標 本時，請按國家生物試驗室安全防護條列執行。
11、 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應終止液除外）
12、 試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴禁混用，否則將影響試驗結果！