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ELISA試劑盒包被大有學問,不容小覷
閱讀：2555 發布時間：2017-1-4ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到*科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。今天上海恒遠小編著重帶您了解ELISA試劑盒的包被！
說到ELISA包被，可能大多朋友們關注的是包被的時間與溫度。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。
蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射，以增加其吸附性能。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。也可用親和素生物素系統作間接包被，即用親和素先包被載體，然后加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。
IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯結多發生在Fc段上，抗體結合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。間接包被的另一優點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，抗心磷脂抗體的ELISA試劑盒一般采用這種包被方式。固相載體先用堿性蛋白質，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被，也可提高核酸的結合力。
脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過一夜或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質自然干固在固相表面。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。
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