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ELISA技巧學(xué)習(xí)很重要
閱讀：1569 發(fā)布時(shí)間：2018-11-7ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)是需要操作者們自身積累的，但是掌握了實(shí)驗(yàn)技巧之后可對(duì)實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)與操作事半功倍。ELISA技巧學(xué)習(xí)很重要！下面一起來看看上海恒遠(yuǎn)生物公司今天給大家?guī)砹四男?shí)驗(yàn)技巧內(nèi)容：
抗原抗體反應(yīng)要求在適比例條件下進(jìn)行，ELISA反應(yīng)試劑多，其工作濃度不同對(duì)結(jié)果影響較大，因此必須對(duì)包被抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)進(jìn)行*工作濃度的滴定和選擇，以達(dá)到zui佳的測(cè)定條件。
(一)方陣(棋盤)滴定法選擇包被抗原的工作濃度：
用包被液將抗原作一系列稀釋(1:50～l:800)后，按行進(jìn)行包被、洗滌。按列分別加入用稀釋液1:100稀釋的強(qiáng)陽性、弱陽性、陰性參考血清及稀釋液(作空白對(duì)照)，保溫，洗滌。加工作濃度酶標(biāo)抗體，洗滌，加底物顯色，加酸終止反應(yīng)后讀取A值。選擇強(qiáng)陽性參考血清A值；為0．8左右，陰性參考血清A值<0．1的包被抗原稀釋度為工作濃度。
(二)方陣(棋盤)法選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度：
將抗體用包被液稀釋為10mg/L、lmg/L、0.1mg/L三個(gè)濃度按行包被，每一個(gè)濃度包被三行(每行3孔)，分別在每個(gè)濃度包被的、二、三行中分別加入強(qiáng)陽性抗原，弱陽性抗原和陰性對(duì)照，將酶標(biāo)抗抗體用稀釋液稀釋為1:l 000、l:5000、l:10000三個(gè)濃度，分別加入每個(gè)濃度包被的、二、三列中。加底物顯色，加酸終止反應(yīng)，分別讀取A值。以強(qiáng)陽性抗原液A值在0.8左右，陰性參考A值<0.1的條件為適條件。據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的zui佳工作濃度。
抗體的稀釋度包括特異性抗體，中間抗體及標(biāo)記抗體。任何一種免疫組化方法要想得到令人滿意的染色效果，必須將抗體進(jìn)行zui佳稀釋。一般來說，抗體的稀釋度取決于下列因素。
1.抗體的濃度(亦稱滴度)
每毫升溶液內(nèi)所含抗體分子越多，滴度就越高，該抗體可高度稀釋，尤其是特異性一抗的稀釋度。一般商品化抗體只知道每毫升含多少抗體蛋白量，不知道所含抗體分子。自己制備抗體可通過瓊脂糖雙擴(kuò)散或放射免疫法進(jìn)行測(cè)定。商品化抗體一般告知大約的稀釋度，例如用PAP法可1：100～1：200稀釋。但往往購買到一種新抗體后，需要利用組織切片進(jìn)行zui佳稀釋度的測(cè)定。
2.抗體的配制
抗體的配制及使用是開展免疫組織化學(xué)工作的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，其檢測(cè)的結(jié)果既要可靠，又要能重復(fù)，這就要求實(shí)驗(yàn)人員在配制抗體過程中要注意其度。目前，隨著抗體稀釋液的穩(wěn)定性提高，一次稀釋抗體可用一年。當(dāng)然，還可以購買到商品化即用型一抗，使用非常方便。
3.抗體稀釋液的種類
可根據(jù)需要選擇不同的抗體稀釋液。如稀釋當(dāng)天用完的一抗，用0.05m01/L(pH7.6)TBS即可。如需長(zhǎng)期保存，可用如下稀釋液：取0.1g明膠(或綠色明膠)溶在100ml0.05m01/L(pH7.6)TBS緩沖液中，邊攪拌邊加熱至60℃，待*溶解后，冷卻至室溫，加入1g牛血清白蛋白，后加入200mg aN3，分裝保存在一40℃中備用。另外，抗體原液應(yīng)分裝后一40℃保存，可保存5年以上。
ELISA試劑盒應(yīng)保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。上海恒遠(yuǎn)生物公司提醒您：從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。咨詢采購高品質(zhì)進(jìn)口/國產(chǎn)ELISA試劑盒，歡迎您致電聯(lián)系我公司業(yè)務(wù)員。