化工儀器網
技術文章
細胞傳代的辦法您做對了嗎？
閱讀：995 發布時間：2019-12-6經過自主研發和吞并重組不斷擴展企業產品線，逐漸發展為試劑的專業商和電子商務集成供應商，成為試劑職業發展的者。開端細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否*。
一：細胞與試劑方面：
1.細胞(單層細胞，鏡檢合適)
2.培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等合適細胞有要求的培養液)
3.滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬單位）
4.7.5％NaHC03 溶液
5.0.25％胰蛋白酶
6. PBS 洗液。
二：實驗小用具方面：
1.小方瓶(100m1)
2.克氏瓶
3.膠塞
4.吸管(10ml、1m1）
5.細胞吹打管（20 ml）(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)
6.C02 孵箱
7.超凈臺
8.倒置顯微鏡
9.4℃、- 20℃冰箱
三：細胞傳代的操作過程
1.選擇細胞：鏡檢細胞，選擇成長狀態杰出，細胞界限明晰，具有立體感，形態好無污染、無異常及可疑病變細胞。
2.配制細胞培養液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養液100ml 內，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。
3.消化細胞：先用PBS 洗液沖洗細胞外表1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細胞瓶內加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細胞瓶平放，使消化液*覆蓋細胞外表。
4.至細胞*脫落到胰酶中：每瓶加入10m1 細胞培養液吹打渙散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養量。
5.加塞，置于37±1℃孵箱培養。約2～4 天成片(由細胞接種濃度決定)。
6.填寫傳代記載。