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ELISA試劑盒HIV抗體檢測操作要點
閱讀：2197 發布時間：2020-3-23 ELISA試劑盒HIV抗體檢測操作要點
ELISA試劑盒HIV抗體檢測是發現HIV感染的有效途徑，ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體普遍使用的方法之一。具體操作過程中ELISA法的影響因素較多，稍有不慎就會降低實驗的準確性。避免諸多影響因素、保證結果準確性，才能夠充分發揮ELISA法的優點，經過多次實驗的總結和分析，這篇文章分享了相關的經驗。
1 試劑的選擇
通常所使用的ELISA試劑盒或其它試劑，必須是經國家食品藥品監督管理局注冊批準、批檢合格、臨床評估質量優良，并且均在有效期內使用。不同批號試劑組分不得混用，過期的試劑一律不得使用，首先提升實驗結果的可信度。
2 ELISA試劑盒樣品的采集與保存
用于檢測的標本應保持新鮮，標本的采集應盡量避免溶血，因紅細胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質，干擾結果，會出現假陽性；標本如果受細菌污染，會因菌體中含有內源性過氧化物酶而出現假陽性；混濁或有沉淀的血清樣品應離心，待澄清后方可檢測，避免對結果造成影響。
用于HIV抗體檢測的血清或血漿樣品應存放于-20 ℃以下，短期（1周內）進行檢測的樣品可存放于2 ℃～8 ℃。融解時應上下顛倒充分混勻，動作要輕緩，避免產生氣泡。同時應注意避免樣品反復凍融，否則會造成樣品抗體效價降低，影響其結果。
3 加樣
加樣前應注意將微孔板條從冷藏環境中取出放置室溫，待試劑平衡后方可使用，未用完者需放入有干燥劑的密封袋中保存。整個HIV抗體檢測必須符合《全國艾滋病檢測技術規范》，嚴格防止交叉感染。操作時必須戴手套、穿工作衣，嚴格執行消毒隔離制度。
加樣要用微量移液器（要求準確性高并定期進行校正），按規定的量加入孔內，避免加在孔壁的邊緣，垂直加樣，不要使吸頭碰到酶標板孔上的已包被的抗原，加樣時盡量慢吸快放，同時注意不要濺出，避免產生氣泡。
每次加樣都要更換吸頭，做到一樣一吸頭，防止發生交叉污染，干吸頭預先在血清中抽吸3次，以便保證加樣量的準確性。滴加試劑應先將滴瓶搖勻并擠去*滴后再進行滴加，以免產生氣泡。
4 ELISA試劑盒溫育
抗原抗體反應需要在一定的溫度下（zui適溫度為37 ℃），經過一定的時間才能達到反應的平衡點。溫育一般采用能使反應液溫度迅速達到平衡的水育法，一種是放在水育箱的隔板上，另一種是放在溫箱的濕盒內，水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊加放置，以保證各板的溫度平衡一致。
5 洗板
由于待檢血清中可能有HIV病毒的存在，采用ELISA法進行檢測HIV抗體時，盡量使用洗板機洗板，一方面可以確保檢測人員的安全，另一方面可以防止環境污染。洗板在ELISA檢測中是一個非常重要的環節，洗板的合格與否直接影響檢測結果的準確性。因此，洗板時一定要先放好，洗滌開始時注意觀察洗板機上的每個吸液針是否都一致地插入孔底，并且將孔內液體全部吸干，按說明書要求設置浸泡的時間以及洗滌的次數。洗滌結束后進行拍板，同時要用蒸餾水沖洗管道，避免由于洗液的結晶而造成管道堵塞。同時要注意各種ELISA試劑盒的洗滌液不可混用。
6 ELISA試劑盒顯色與觀察結果
按照說明書規定的時間、溫度恒定、反應后終止，并在顯色反應終止后立即用酶標儀進行比色。
7 小結
ELISA試劑盒在加液與混勻過程中不應產生氣泡，否則會使測定的OD值偏高，易出現假陽性結果。
ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體普遍使用的方法，選擇合格的試劑和儀器，操作中嚴格按照ELISA試劑盒說明書要求實驗，這樣就能保證檢測結果的準確性。