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植物過氧化物酶（POD）ELISA試劑盒 使用手冊
閱讀：1237 發布時間：2022-8-2【產品名稱】
中文名稱：植物過氧化物酶（POD）酶聯免疫試劑盒
【包裝規格】
96T/盒
【預期用途】
僅供科研使用，本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關樣本中過氧化物酶（POD）活性。
【檢測原理】
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物過氧化物酶（POD）水平。用純化的植物過氧化物酶（POD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶（POD），再與HRP標記的過氧化物酶（POD）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶（POD）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中植物過氧化物酶（POD）活性濃度。
【產品性能】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣(如有漏氣，不影響使用）。
2、劑量反應曲線線性
標準品劑量反應曲線相關系數r值，大于等于0.9900。
3、檢測范圍
0.6 mU/L - 28 mU/L。
4、靈敏度
檢出劑量小于0.15 mU/L。
5、精密度
精密度用樣品測定值的變異系數CV 表示。CV（%） = SD/mean×100
批內差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批間差：選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定10 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內差： CV<6.8%
批間差： CV<7.2%
6、回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
7、線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率
注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）
2、精密移液器、吸頭、加樣槽
3、蒸餾水或去離子水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、EP管
7、無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
注意：試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實驗后1 個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。
【樣本要求】
1.樣本類型和采集
血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞裂解液: 吸棄培養液，用PBS（0.01 M，pH 7.4）將細胞洗一遍。用細胞刮刮下細胞（不能用胰酶和EDTA 處理），加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸浮細胞可省略。收集細胞懸液，4℃ 1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。加入適量的預冷PBS或非變性細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,通常6孔板一個孔的細胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融3次，使細胞充分裂解,也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.樣本保存和穩定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融。