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恒遠生物|雞二胺氧化酶(DAO)ELISA實驗說明
閱讀：870 發(fā)布時間：2024-3-27檢測范圍：
3pg/ml-150pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中二胺氧化酶(DAO)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞二胺氧化酶(DAO)水平。用純化的雞二胺氧化酶(DAO)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入二胺氧化酶(DAO)，再與HRP標記的二胺氧化酶(DAO)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞二胺氧化酶(DAO)濃度。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
60pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
30pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
15pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
7.5pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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