化工儀器網
技術文章
鹽析法與抗體的分離純化
閱讀：767 發布時間：2024-5-28鹽析法原理
蛋白質的溶解度在必定范圍內隨鹽的濃度而改變。在低鹽濃度下溶解度跟著鹽濃度而添加，當鹽濃度到達必定水平常，其溶解度又以不一樣程度降低并先后分出。其原理是因為蛋白質分子的極性基團有著靜電引力，當水中參加少數鹽類時，鹽類離子與水分子對蛋白質分子上極性基團的影響，使蛋白質在水中溶解度增大。但鹽濃度添加到必定程度時，水的活度降低，蛋白質外表的電荷被中和，水化膜損壞，致使蛋白質分子互相集合而沉積。鹽析法即是依據不一樣蛋白質在必定濃度的鹽溶液中溶解度不一樣而到達互相別離的辦法。
鹽的挑選
蛋白質鹽析常用中性鹽，主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其間使用最-廣的是硫酸銨，其長處是溫度系數小，溶解度大（25℃時飽滿溶解度為4.1mol/L，即767g/L）。在不一樣的飽滿硫酸銨溶液范圍內，不一樣蛋白質依次分出；并且硫酸銨價廉易得，分段效果好，不簡單導致蛋白質變性。
硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間，市售的硫酸銨還常富含少數游離硫酸，pH值通常在4.5以下，須用氨水調節其pH值至7.0擺布。
鹽析須知
1、鹽的飽滿度：鹽的飽滿度是影響蛋白質鹽析的主要因素，不一樣蛋白質的鹽析請求鹽的飽滿度不一樣。別離幾個混合組分的蛋白質時，鹽的飽滿度常由低到高逐步添加，每呈現一種蛋白質沉積進行離心別離后，再繼續添加鹽的飽滿度，使第二種蛋白質沉積。如用硫酸鹽鹽析別離血漿蛋白，當飽滿度到達20%時，纖維蛋白原首先分出；飽滿度增至28%~33%時，優球蛋白分出；飽滿度到達33%~50%時，球蛋白分出；飽滿度大于50%以上時，清蛋白分出，免疫球蛋白常在飽滿度在33%開端分出。
2、pH值：在等電點時，蛋白質溶解度最小，簡單沉積分出。故鹽析時除個別特殊情況外，pH值常挑選在被別離的蛋白質等電點附近。
3、蛋白質濃度：在一樣鹽析條件下，蛋白質濃度越高越易沉積，高濃度雖對沉積有利，但濃度過高，也簡單導致別的蛋白的共沉積，故有必要挑選恰當濃度，盡可能避免共沉積效果的攪擾。
4、溫度：因為高濃度的鹽溶液對蛋白質有必定保護效果，鹽析操作一般可在室溫下進行，但在使用某些中性鹽進行鹽析時，溫度對鹽溶解度的影響對比明顯。
5、脫鹽：蛋白質用鹽析沉積別離后，常需求脫鹽才干獲得純品。最-常用的脫鹽辦法是透析。通過透析袋表里的離子交換，最后使透析袋內溶液的鹽濃度與外界相一致。