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那些個步驟詳解，恒遠實驗“單雙”酶切
閱讀：1661 發(fā)布時間：2014-2-20 您聽說過酶切技術(shù)嗎？每一種實驗方法技術(shù)都是有它的實驗原理與目的的。那么酶切技術(shù)呢？問題既然是我們提出的，那么就由我們來為您解答。
酶切可以獲得粘性末端進行連接，它用于驗證DNA重組是否成功，還用于驗證質(zhì)粒酶切位點是否有效。我們下面就來看看那些個步驟詳解，恒遠實驗“單雙”酶切。
實驗之前上海恒遠為您整理出了所需要用到的材料試劑：
我們把實驗的材料準備好了之后就可以進入實驗的操作過程了，本文的標題中，“單雙”酶切您怎么理解？我們來依次看看。
首先來看單酶切：
1、我們在在1.5 mL滅菌離心管中依次加入質(zhì)粒DNA：X μL（約1 μg）、限制性內(nèi)切酶：1 μL（約10 U）、10×buffer：2 μL、ddH2O：補足20 μL。
2、混勻，做好標記。
3、37℃水浴1-3 h。
4、70℃水浴10 min中止反應。
5、電泳檢測酶切效果。
雙酶切：
1. 在1.5 mL滅菌離心管中依次加入質(zhì)粒DNA：X μL（約1 μg）、限制性內(nèi)切酶1：1 μL（約10 U）、限制性內(nèi)切酶2：1 μL（約10 U）、10×buffer：1或2 μL、ddH2O：補足20 μL。
2、混勻，做好標記。
3、37℃水浴1-3 h。
4、70℃水浴10 min中止反應。
5、電泳檢測酶切效果。
實驗結(jié)束之后要怎么去分析其結(jié)果呢？我們假若一種酶在環(huán)狀質(zhì)粒DNA中只有一個酶切位點， 且酶切*，紫外燈下檢測電泳結(jié)果，則單酶切應為一條帶， 而雙酶切則為兩條帶。如果條帶數(shù)目多于理論值，那么有可能是酶切不*。如果酶切結(jié)果與酶切前的質(zhì)粒條帶一樣，比如說超螺旋、線性和開環(huán)三條帶，則說明質(zhì)粒*沒有被切開。
您在操作實驗的過程中也要注意，您酶切的選擇原則一般是盡量擴大酶切體系，這樣抑制因素得以稀釋；基因組DNA或質(zhì)粒DNA酶的用量較一般DNA大，一般為1μg/10U；所加酶的體積不能超過酶切總體積的1/10，否則甘油濃度會超過5%，會產(chǎn)生星號活力；對難切的質(zhì)粒或基因組DNA應延長反應時間4―5hr， 甚至過了一個晚上。滅活限制性內(nèi)切酶活性可以采用加熱滅活，乙醇沉淀，酚/氯仿抽提，添加EDTA或SDS等方法，具體每一種酶可能有些方法不能*滅活，這一點需要您多要注意。
今天的文章到這里就結(jié)束了，實驗中的材料、步驟以及zui后需要注意的事項我們都為您總結(jié)出來了，如果您還有其它實驗、產(chǎn)品、技術(shù)方面的問題都可以我公司的，上海恒遠非常感謝您的支持！