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九月學習:ELISA試劑盒技術資料
閱讀：1034 發布時間：2014-9-12 新學期已經進行兩周了，九月也近乎中旬，那么面對新學期的開始，是不是讓不少ELISA實驗的新手同學們有點兒手足無措呢？下面一起來看下上海恒遠今天為您分享的實驗內容吧，九月學習：ELISA試劑盒技術資料。
·DIY夾心法ELISA常見技術指南
選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。為了優化靈敏度，建議放置一個晚上孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時。
·ELISA用處
1. 將酶催化反應的放大作用和抗原抗體親和反應的高度專一性、特異性相結合，以酶標記的抗原或抗體作為主要試劑進行免疫測試，所以具有很高的靈敏度。
2. 實現了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
3. 其抗原抗體反應具有高度的特異性。
4. 為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無需另行配置。
·灰區的設置
通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結果報告的依據。
·標本復查
ELISA手工檢測過程復雜，影響因素較多，即使室內質控在控，也可能因孔間差異而造成結果的差異，因此加大復查力度是保證結果準確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結果進行復查。
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