化工儀器網
技術文章
科研專家對Elisa試劑盒實驗的經驗講談
閱讀：1294 發布時間：2015-7-20根據個人的實驗經驗，大家都或多或少掌握了一些小技巧。zui終的實驗結果是受整個操作過程及試劑本身影響的，所系還要多學習，多參考，讓實驗結果更加。Elisa檢測系統是免疫學反應應用到科研生產中zui為靈敏的技術手段，有著十分重要的作用。下面是上海恒遠生物科研專家對Elisa試劑盒實驗的經驗講談：
一、包被原的性質很重要
蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被。
1.親和素生物素：先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。
2.脂類物質：可將其在有機溶劑中溶解后加入Elisa板孔中，開蓋置冰箱或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質自然干固在固相表面。
3.小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。
二、Elisa試劑盒實驗包被液的選擇
一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
三、Elisa試劑盒實驗封閉
繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥Elisa后的步驟中干擾物質的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用(5%-10%)；還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據試驗具體來實踐。
zui后上海恒遠特別提醒，每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現問題也好分析。購買我公司Elisa試劑盒，有任何疑問都可業務員，我們將提供全程！