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DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B操作注意事項
閱讀：3183 發(fā)布時間：2016-3-8DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B
DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B是將二乙胺基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。
- 外觀
本品呈白色，球狀、無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。
- 理化指標
項 目 | 指 標 |
離子交換基團 | -O-CH2CH2-N+(C2H5)2H |
離子交換類型 | 弱陰離子，可交換離子Cl- |
基 質(zhì) | 6%交聯(lián)瓊脂糖 |
蛋白質(zhì)吸附容量 | 120mgHSA/ml介質(zhì) |
總離子交換容量 | 0.13~0.17 mmol/ml 介質(zhì) |
形狀 | 球形 |
粒徑 | 45~165 μm |
流速* | 150 cm/h |
工作溫度 | 4~40℃ |
耐熱 | pH7水中120℃ 30min |
耐壓 | 0.3 MPa |
pH穩(wěn)定性 | 1~14 (短時間 ,在位清洗);2~12 (長時間) |
pH工作范圍 | 3~12 |
化學穩(wěn)定性 | 在以下液體中穩(wěn)定： 所有常用的水相緩沖液；1mol/L 氫氧化鈉； 8mol/L 尿素；6mol/L 鹽酸胍 ；70% 乙醇 |
*檢測條件： 層析柱10mm×300mm *柱床高15cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。
- 包裝
產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小”等內(nèi)容。
- 運輸
運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
- 貯存
產(chǎn)品應密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
- 注意事項
本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸；避免在pH值 < 4時長時間暴露(一周，20℃)。
- 保質(zhì)期
5年。
- 應用
本產(chǎn)品具有高化學穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機械性能、可在位清洗、多次重復使用等特點，非特異性吸附低，回收率高，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，適用于在pH工作范圍內(nèi)可形成負離子的生物大分子的分離純化，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。
下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。
8.1 裝柱
（1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。
（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
（4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
8.2 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液，如Tris 、PBS等。
8.3 上樣
（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。
（2）一般情況是讓目標產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)品。
（3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動相的離子強度和pH值。鹽濃度小，介質(zhì)對樣品組分吸附較牢。用DEAE介質(zhì)時，推薦的pH值是大于目標產(chǎn)品等電點1個單位。
8.4 洗脫
DEAE介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小pH值進行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
8.5 再生
一般用高鹽濃度的緩沖液（含1~2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
8.6 在位清洗
（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
（2）對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。
（3）對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
8.7 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
在使用過程中，不能使用強酸，如使用酸洗，應使用濃度低于0.1 M的冰醋酸。
8.8 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除：
（1）2倍柱體積的70%乙醇；
（2）2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5；
（3）1倍柱體積4M尿素；
（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8.9 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
8.10 滅菌
置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中120℃下30分鐘。