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問題一：選擇試劑，選擇質量優良的檢測試劑，一定要嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
問題二：加樣，可能出現的原因有三個：
1、可能是血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 
2、可能是手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；
3、可能是加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
① 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
② 加樣后及時放入孵箱。 
③ 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
④ 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
⑤ 標本較多時，請分批操作。
問題三：孵育
    孵育可能是因為在孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*；當然也可能是因為孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。原因出現了，我們自然有解決的方法啦，解決辦法就是貼封片或加蓋； 還有要按說明步驟嚴格控制操作時間。
    其實呢在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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