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ELISA方法檢測(cè)糖類(lèi)抗原19-9(CA19-9)原理

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人糖類(lèi)抗原19-9CA19-9聯(lián)免疫分析



試劑盒使用說(shuō)明書(shū)



本試劑盒僅供研究使用。



檢測(cè)范圍:                                                                                                       96T


50U/L -2200U/L


使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中糖類(lèi)抗原 19-9CA19-9含量。 實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人糖類(lèi)抗原 19-9CA19-9)水平。用純化的抗 體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入糖類(lèi)抗原 19-9CA19-9,再 與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯 色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺 和樣品中的糖類(lèi)抗原 19-9CA19-9正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人糖類(lèi)抗原 19-9CA19-9)濃度。

試劑盒組成


1

30 濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品(4000U/L

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12 ×8

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說(shuō)明書(shū)

1

5

顯色劑 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑 B

6ml×1/

12

密封袋

1 個(gè)

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP活性。 操作步驟

1.    標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。


2000U/L

5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1000U/L

4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

500U/L

3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

250U/L

2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

125U/L

1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液




2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,


然后再加待測(cè)樣品 10μl樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.    溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 鐘。

4.    配液:將 30 濃縮洗滌液用蒸餾水 30 稀釋后備用

5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

6.    加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

7.    溫育:操作同 3

8.    洗滌:操作同 5。

9.    顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色

10 .

10.  終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.  測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):



計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD  值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣

OD 由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),


即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 控制在 5 鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD ,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì) 算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個(gè)月

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