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恒遠文獻:TNF－a與TGF－β１ELISA試劑盒在文獻中的應用
閱讀：232 發布時間：2020-5-29高糖對大鼠腹膜間皮細胞分泌細胞因子的影響及苦參堿的干預作用
朱士彥１，甘 平２，廖 彧１，巫建芳１，龍貴華１
（１．廣東省佛山市順德區龍江醫院腎內科 ５２８３１８；
２．貴陽醫學院附屬醫院腎內科，貴陽 ５１００００）
［摘要］ 目的 研究高糖刺激下大鼠腹膜間皮細胞分泌腫瘤壞死因子α（ＴＮＦ－α）和轉化生長因子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的干預作用，探討腹膜纖維化發生機制。方法 通過體外培養大鼠腹膜間皮細胞（ＰＭＣｓ），依據加入藥物濃度分成５組：２．５％葡萄糖組（ｎ＝１５，Ａ 組）；低糖苦參堿組（２．５％葡萄糖，ｎ＝１５，Ｂ組）；４．２５％葡萄糖組（ｎ＝１５，Ｃ組）；高糖 苦 參 堿 組（４．２５％葡萄 糖，ｎ＝１５，Ｄ組）；對照組（ｎ＝１５，Ｅ 組，僅加不含血清的 ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ 培養 基），分別 于 第 ２４、４８、７２小時收集培養上清液，采用ＥＬＩＳＡ 法測定各組培養上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 濃度 的 變 化，同時觀察各組大鼠腹膜間皮細胞光鏡下的表現。結 果 光 鏡下，可見 Ｅ組和 Ｂ組腹膜間皮細胞小，呈卵圓形或圓形，生長較為密集。Ａ、Ｃ、Ｄ組腹膜間皮細胞大、呈梭形或多邊形，分布較為稀疏；在 Ａ 組，培養上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組無明顯統計學變化（Ｐ＞０．０５）；而在Ｃ組，培養上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組增加明顯，差異有統計學意義（Ｐ＜０．０５）。在 Ｂ組和 Ｄ組中，ＰＭＣｓ分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平 Ｂ組較 Ａ 組減少，差異無統計學意義（Ｐ＞０．０５）；Ｄ組較 Ｃ組明顯下降，差異有統計學意義（Ｐ＜０．０５）。結論 苦參堿能拮抗高糖致大鼠腹膜間皮細胞分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１，從而保護腹膜間皮細胞。
［關鍵詞］ 葡萄糖；苦參堿；腫瘤壞死因子α；轉化生長因子β１；腹膜間皮細胞腹膜 透 析 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉａｌｙｓｉｓ，ＰＤ）由于自身生物相容 性好，中分子物質清除效率高等優點，成為目前終末期腎臟疾病的shou選透析方式。但是反復發作腹膜炎癥可使有效腹膜透析面積減少，從而導致腹膜對溶質的清除及水分的超濾功能減退甚至功能衰竭，是部分 ＰＤ患者改行血液透析治療的主要原因之一 ［１］。實驗表明，腹膜長期處于高滲微環境，可終破壞腹膜的整體結構性，葡萄糖及其與機體產生的炎變產物是致 ＰＤ相關性腹膜超濾衰竭重要原因之一［２－３］。如何從病理生理學機制方面深入探究腹膜超濾衰竭的發病機理，成為近年來醫學研究的重要課題內容。
現有研 究 證 實 人 腹 膜 間 皮 細 胞 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＰＭＣｓ）具有多重重要的生理功能，如分泌、吸收、修復、支持等。在腹膜發生炎變時，ＰＭＣｓ自身分泌的炎性因子和細胞因子，又影響到腹膜 自 身 的 修 復［４－５］。本研 究 旨 在 探 討 高 糖 致大鼠 ＰＭＣｓ分泌腫 瘤 壞 死 因 子α（ＴＮＦ－α）和轉 化 生 長 因 子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的抗纖維化作用，為臨床防治腹膜纖維化，延緩病人的生命，有著極其重要的現實意義。
１ 材料與方法
１．１ 材 料 選 取 健 康 ＢＡＬＢ／ｃ大 鼠 ３５ 只，雌 雄 兼 用，體 重１００～１２０ｇ，同等條件下 飼 養，鼠 齡６～８周，由貴陽醫學院動物實驗中心提供。
１．２ 主要試劑 胎牛血清（ＦＣＳ），ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ培養基，胰蛋白酶液，卵母細胞裂解液，ＤＡＢ顯色劑（編號 ＡＲ１０２２），抗體稀釋液（編號 ＡＲ１０１６），Ｈａｎｋｓ平衡 鹽 溶 液，多 聚 賴 氨 酸，枸櫞酸鹽緩沖液，以上均購自鄭州益康生物工程有限公司；ＴＮＦ－αＥＬＩＳＡ 試 劑 盒 （上海恒遠生物科技有限公司，編 號：ＡＲ２０５３）；ＴＧＦ－β１ ＥＬＩＳＡ 試劑 盒（上海恒遠生物科技有限公司，編號：ＡＲ２０９５）；即用型 ＳＡＢＣ 免疫組化染色試劑盒（上海恒遠生物科技有限公司，編號：ＳＡ１０２０）；兔抗人細胞角蛋白１８抗體、抗人波形蛋白（上海聯碩生物科技有限公司）；兔抗 人 第Ⅷ因子相關抗原抗體（上海聯碩生物科技有限公司）；２．５％、４．２５％腹膜透析液２Ｌ（廣州 百 特 公 司）；苦參 堿 注 射 液，每 支１５０ｍｇ（１０ ｍＬ），山西振東泰盛制藥有限公司，批 號Ｈ２００５９３３５。
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