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公司動(dòng)態(tài)

以毛細(xì)管轉(zhuǎn)移方式進(jìn)行Northern Blotting轉(zhuǎn)印實(shí)驗(yàn)

閱讀:2305          發(fā)布時(shí)間:2012-10-18

 以毛細(xì)管轉(zhuǎn)移方式進(jìn)行Northern Blotting轉(zhuǎn)印實(shí)驗(yàn)

要 進(jìn)行北方雜合反應(yīng)前,必須先將RNA自洋菜膠體轉(zhuǎn)移至硝化纖維紙(nitrocellulose membrane) 或尼龍膜 (nylon membrane) 上,這一個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法 (capillary transfer)、真空轉(zhuǎn)移法 (vacuum transfer) 與電轉(zhuǎn)印法 (electroblotting)。 毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法借助吸水紙吸收轉(zhuǎn)移緩沖液時(shí)所產(chǎn)生的牽引力量將RNA自洋菜膠體轉(zhuǎn)移至膜上;要轉(zhuǎn)印*,起碼需要作用6 h以上。 雖然所需花費(fèi)的時(shí)間比較長,以其不須要特別的儀器設(shè)備,毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA時(shí)采用變性聚丙烯酰胺膠體電泳,則必須以電轉(zhuǎn)印法進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)印。至于膜的選擇,硝基纖維素膜的優(yōu)點(diǎn)是比較不會(huì)產(chǎn)生非專一性反應(yīng);不過其一旦 被潤濕再烘干的后,容易碎裂,不適用于進(jìn)行多次雜合反應(yīng)。 尼龍膜的優(yōu)點(diǎn)是韌性好,與核酸結(jié)合的能力也相當(dāng)強(qiáng),正可以彌補(bǔ)硝基纖維素膜的缺點(diǎn),現(xiàn)已成為主流。 一旦將RNA轉(zhuǎn)移至膜上后,即可以利用紫外線照射法 (uv irradiation) 或真空干燥法 (在真空下80℃加熱2 h) 將其固定于轉(zhuǎn)印膜上。

儀器用具:塑料盒;玻璃板;裁紙刀

藥品試劑:20×SSC (3 M NaCl, 300 mM sodium citrate);尼龍膜;3MM 濾紙;吸水紙;dH2O/DEPC

上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商是一家生物技術(shù)企業(yè),公司集經(jīng)銷批發(fā)ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒為一體的有限責(zé)任公司,是一家經(jīng)國家相關(guān)部門批準(zhǔn)注冊的企業(yè)。ELISA試劑盒,生物試劑,進(jìn)口培養(yǎng)基,胎牛血清,抗體等產(chǎn)品已國內(nèi)大部分地區(qū) ,銷售額逐年穩(wěn)步上升。

方法步驟:

1) 將甲醛洋菜膠體移放在塑料盒內(nèi),以dH2O/DEPC沖洗數(shù)次,以便去除甲醛。

注意:在移動(dòng)膠體時(shí)請?zhí)貏e留心,不要把膠體弄破了!

2) 注入100 mL 20×SSC,靜置5 min。

3) 根據(jù)圖所示,依序在塑料盒上堆棧玻璃板、濾紙 (作為鹽橋)、電泳膠、尼龍膜、三層濾紙、與吸水紙,以便以毛細(xì)管轉(zhuǎn)移方式將RNA 轉(zhuǎn)印于尼龍膜上;塑料盒內(nèi)裝入適量20×SSC,以便作為轉(zhuǎn)移緩沖液。


以毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法進(jìn)行核酸轉(zhuǎn)印

注意:

a. 濾紙與尼龍膜應(yīng)先以20×SSC 潤濕,再用于堆棧。

b. 在濾紙、尼龍膜、與電泳膠夾層間可能會(huì)有氣泡存在,因此在放好電泳膠、尼龍膜或?yàn)V紙后,應(yīng)立即檢視,并以食指輕輕平移的方式小心趕走氣泡。

c. 此轉(zhuǎn)印步驟將持續(xù)至隔天才結(jié)束。

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