化工儀器網
產品簡介
上海恒遠公司提供美國進口“人泛素連接酶（E3） "，各種標本、種屬、具體指標齊全，品種多，質量好，靈敏度高，詢價或在線咨詢。
詳細介紹
中文名稱：人泛素連接酶（E3）
組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。
規格：96T/48T
性狀：液體
保存：2-8℃
有效期：6個月
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。
2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。
4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
人泛素連接酶（E3）操作步驟（中文）
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
| 8 ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| |
| 4 ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| |
| 2 ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| |
| 1 ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| |
| 0.5 ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| |
| 2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 | ||||
| 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后 | ||||
| 再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸 | ||||
| 及孔壁，輕輕晃動混勻。 | ||||
| 3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 | ||||
| 4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 | ||||
| 5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復 | ||||
| 5次，拍干。 | ||||
| 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 | ||||
| 7.溫育：操作同3。 | ||||
| 8.洗滌：操作同5。 | ||||
| 9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. | ||||
| 10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 | ||||
| 11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后 | ||||
| 15分鐘以內進行。 | ||||