化工儀器網
技術文章
人胰島素試劑盒實驗原理
閱讀：1829 發布時間：2012-12-19人胰島素試劑盒操作步驟：
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內壓 實自封條，密封口袋，放回4℃。
2．空白孔加標準品和標本稀釋液，其余相應孔中加標本或不同濃度標準品（100ul/孔），用封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育90分鐘。
3．提前20分鐘準備生物素化抗體工作液。
4．洗板5次。
5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液（100ul/孔）。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育60分鐘。
6．提前20分鐘準備酶結合物工作液。避光室溫（22-25 ） ℃ 放置。
7．洗板5次。
8．空白孔加酶結合物稀釋液，其余孔加入酶結合物工作液（100ul/孔）。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。
9．打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。
10．洗板5次。
11．加入顯色底物（TMB）100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。
12．加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值（3分鐘內）。在儀器保存讀數結果并打印一份紙質結果。
13．實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結束。 建議保存酶標板框，以備下次或者今后試驗使用。
人胰島素試劑盒檢測前準備工作：
1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:20）。未用完的放回4℃。
3. 標準品: 加入標準品/標本稀釋液0.5ml至凍干標準品中，靜置15分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為1000 pg/ml）。然后根據需要進行稀釋。（建議標準曲線使用以下濃度： 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/ml）。復溶標準品原液（1000 pg/ml）若未用完請分裝后放入-20℃以下電冰箱內保存，保存兩個月。已稀釋的標準品請廢棄。
4. 生物素化抗體工作液：按當次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:30）成工作濃度。當日使用。若實驗次數過多導致生物素化 抗體量不足，可向我們公司單獨購買生物素化抗體。（須提供抗體批號）
5. 酶結合物工作液：按當次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃 縮酶結合物（1:30） 成工作濃度。當日使用。若實驗次數過多導致濃縮酶結合物量不足， 可向我們公司單獨購買濃縮酶結合物。（須提供酶結合物批號）
洗滌方法：
1. 自動洗板機：要求注入的洗滌液為350ul，注入與吸出間隔15－30秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350ul，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。