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細胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集方法
閱讀：6819 發布時間：2015-6-16通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步，下面簡單介紹一下細胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法。
細胞裂解液
1) 吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2) 收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。
3) 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4) 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
5) 4℃10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
組織勻漿液
1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。
2) 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分。
3) 將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）。
4) 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
注意：保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。