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大鼠熱休克因子1

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產(chǎn)品名稱:大鼠熱休克因子1

英文名稱:Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA KIT

產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標(biāo)本齊全:血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
經(jīng)營(yíng)品牌:美國(guó)RD分裝,原裝、美國(guó)RB原裝
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大鼠熱休克因子1  ELISA技術(shù)操作要點(diǎn),結(jié)合物
酶標(biāo)記的抗原或抗體稱為結(jié)合物(conjugate)。抗原由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同,可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原,基本上可參考抗體酶標(biāo)記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。
1.戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑,可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法(如連接AP),也可用二步法(如連接HRP)。舉例如下:
2~5mg純抗體與5mgAP混合于0.1mol/LpH6.8的磷酸緩沖液1ml中,4℃下對(duì)同上緩沖液透析平衡。磁力攪拌下,緩慢加入1%戊二醛0.05ml,在室溫下放置2小時(shí)。在4℃下對(duì)0.05mol/LpH8.0Tris緩沖液透析平衡,即得酶標(biāo)抗體。
辣根過氧化物酶可溶解于50%飽和度硫酸銨中。用上法交聯(lián)后可用50%飽和度硫酸銨沉淀酶標(biāo)抗體,棄去上清中游離酶。
戊二醛一步法操作簡(jiǎn)便、有效,而且重復(fù)性好。缺點(diǎn)是交聯(lián)時(shí)分子間的比例不嚴(yán)格,大小也不一,影響效果。
制備HRP抗體結(jié)合物也可用二步法,即先將HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛,在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。此法的效率可高于一步法10倍左右。
2.過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含18%碳水化合物,過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑,可與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成按摩爾比例結(jié)合的酶標(biāo)結(jié)合物。有人認(rèn)為此法為辣根過氧化物酶交聯(lián)zui有效的方法。但也有只認(rèn)為由于所用試劑較為劇烈,各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重復(fù)。

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