詳細介紹
產品名稱:植物維生素D3 ELISA試劑盒
英文名稱:Plant Vitamin D3,VD3 ELISA KIT
Elisa實驗前的準備
1仔細閱讀說明書
2確定試劑盒在有效期內
3按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積)
4標本制備要規范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存
5準備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等
6根據檢測標本數量確定所需試劑的量
7按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑
DIY夾心法ELISA常見技術指南
8選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
9ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
10標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節,將凍干的細胞因子復溶。
11一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
12為了優化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。
13若使用過氧化物酶作為顯色系統,應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
14當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
結果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-1標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-1含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍:0-800pg/ml
4、敏感度: 1.0 pg/ml
植物維生素D3 elisa kit elisa法