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產(chǎn)品簡介
上海恒遠(yuǎn)生物是專業(yè)的“兔子基質(zhì)金屬蛋白酶，兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3 ELISA試劑盒"生產(chǎn)企業(yè),產(chǎn)品種類齊全,包括人,大小鼠,兔子,豬等.ELISA采用*抗體,規(guī)范操作,*優(yōu)化方案,并免費(fèi)代測,咨詢。
詳細(xì)介紹
兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3 elisa實(shí)驗(yàn) elisa檢測
產(chǎn)品名稱：兔子基質(zhì)金屬蛋白酶，兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3 ELISA試劑盒
英文名稱：Rabbit matrix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA KIT
標(biāo)本的采集及保存
1. 組織勻漿: 將動物的組織標(biāo)本先用PBS洗滌,去除多余血液,勻漿化后放在20mlPBS中于-20° C放置過夜,第二天,經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜,將勻漿物5000x g離心5分鐘,取上清即可檢測。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月；標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測；高血脂的標(biāo)本不需進(jìn)行特殊處理，可直接檢測。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲坪盟性噭辉噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，均應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。建議各實(shí)驗(yàn)室在操作前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以建立*稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測。
注：
1. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔（不同于空白孔），該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室 溫。使用后立即冷藏保存試劑。
3. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入檢測溶液B或底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板長時間處于干燥狀態(tài)。
4. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
5. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
6. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，請精確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10ul），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；檢測液A、B，以及底物溶液在使用前，應(yīng)置于37℃溫育30分鐘；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
7. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3 elisa實(shí)驗(yàn) elisa檢測