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上海奧析科學儀器有限公司

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酸性羧甲基纖維素酶活力含量測定紫外分光光度法

閱讀:3979      發布時間:2016-6-22
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〔含量測定〕酸性羧甲基纖維素酶活力對照品溶液的

制備取無水葡萄糖對照品適量,精密稱定,加水制成每lml

3mg的溶液,即得。

標準曲線的制備精密量取對照品溶液L 0ml20ml

4. 0ml6. 0ml80ml,分別置10ml量瓶中,各加水至刻度,搖__

勻。分別精密量取上述溶液各0= 5mU25ml具塞刻度試管

中,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液pH t 8)15mU混勻,立即精密

加人35-二硝基水楊酸試液15ml,搖勻5置沸水浴中保溫15

分鐘,取出,置冰水浴中冷卻10分鐘,再加水至刻度,搖勻,靜

90分鐘,以相應的試劑為空白,照紫外-可見分光光度法

(通則0401),在540nm波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐

標,葡萄糖量(mg)為橫坐標,繪制標準曲線。

測定法取本品約LOg,精密稱定9置具塞錐形瓶中,精

密加水100ml,密塞,旋轉振搖(轉速每分鐘200轉)6 0

鐘,濾過,作為供試品溶液(本液應臨用新制)。精密量取

1%羧甲基纖維素鈉溶液15ml,置25ml具塞刻度試管中,

精密加人供試品溶液0. 5mU混勻550°C水浴中保溫30

鐘,取出n照標準曲線制備項下的方法,自立即精密加人3

5-二硝基水楊酸溶液L 50115依法測定吸光度5從標準曲

線上讀出供試品溶液中含還原糖的重量(mg)。空白管加

1%羧甲基纖維素鈉溶液15ml,置50°C水浴中保溫30

分鐘,取出,立即精密加人35-二硝基水楊酸試液L 5ml9

搖勻,精密加人供試品溶液05ml,混勻,照標準曲線制備

項下的方法,自置沸水浴中保溫1 5分鐘起,依法進行。

按下式計算:

X = A X l /0 . 5X100/W 1一水分)X2

式中X 酸性羧甲基纖維素酶活力,U /gl

A 吸光度在標準曲線上查得的還原糖量,mg;

W 取樣量

2 時間換算系數。

l g 固體酶在50°C±l°CpH4. 8 條件下,1 小時水解1%

羧甲基纖維素鈉底物,產生出相當于lm g葡萄糖的還原糖量

為一個酸性羧甲基纖維素酶活力單位,以U /g表示。

本品按干燥品計算,每l g 含酸性羧甲基纖維素酶活力不

得低于150U

 

注:[1]3,5-二硝基水楊酸試液:取苯酚69g,加10%

氧化鈉溶液15ml使溶解,用水稀釋至70ml,搖勻,再加亞硫

酸氫鈉6. 9g,振搖使溶解(甲液取酒石酸鉀鈉255g,加

10%氫氧化鈉溶液300ml使溶解,再加1%35-二硝基水

楊酸溶液880ml9搖勻(乙液);將甲液與乙液混合5搖勻,得黃

色的溶液,貯于棕色瓶中,4°C放置7 天,備用。

[2]構櫞酸鹽緩沖液pH 4. 8) :分別精密量取0. 5mol/L

枸櫞酸溶液60ml0. 5mol/L枸櫞酸三鈉溶液100ml,混勻,精

密量取上述溶液100ml,加水800ml,3mol/L鹽酸溶液或

3mol/L氫氧化鈉溶液調節p H 值至48,移至1000ml量瓶

中,加水至刻度,搖勻,即得。

[3]1%羧甲基纖維素鈉溶液;精密稱取l .O g羧甲基纖維

素鈉,置具塞錐形瓶中,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)

80ml,稱定重量,85°C±5°C邊加熱邊磁力攪拌至*溶解,

放冷,再稱定重量,用枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)補足減失的重

量,搖勻,以3mol/L鹽酸溶液或3mol/L氫氧化鈉溶液調節

p H值至4. 8,移至100ml量瓶中,加枸櫞酸鹽緩沖液

(pH4.8)至刻度9搖勻,即得。

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