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小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)室常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理
閱讀:247 發(fā)布時(shí)間:2018-8-17小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)室常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理
基本原理:將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過sds-page電泳分析,從而證實(shí)兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白,“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡(jiǎn)單易行,操作方便。
二、足印法(Footprinting)
足印法(Footprinting)是一種用來測(cè)定DNA-蛋白質(zhì)專一性結(jié)合的方法,用于檢測(cè)目的DNA序列與特定蛋白質(zhì)的結(jié)合,也可展示蛋白質(zhì)因子同特定DNA片段之間的結(jié)合。其原理為:DNA和蛋白質(zhì)結(jié)合后,DNA與蛋白的結(jié)合區(qū)域不能被DNase(脫氧核糖核酸酶)分解,在對(duì)目的DNA序列進(jìn)行檢測(cè)時(shí)便出現(xiàn)了一段無DNA序列的空白區(qū)(即蛋白質(zhì)結(jié)合區(qū)),從而了解與蛋白質(zhì)結(jié)合部位的核苷酸數(shù)目及其核苷酸序列。
三、染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,chip)
染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具,利用該技術(shù)不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾以及轉(zhuǎn)錄因子與基因表達(dá)的關(guān)系。
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)的原理是:在生理狀態(tài)下把細(xì)胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起,通過超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后,利用抗原抗體的特異性識(shí)別 反應(yīng),將與目的蛋白相結(jié)合的dna片段沉淀下來。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)一般包括細(xì)胞固定,染色質(zhì)斷裂,染色質(zhì)免疫沉淀,交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn),DNA的純化及鑒定。
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