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人結締組織活化肽ⅢELISA試劑盒操作方法

閱讀:376          發布時間:2018-9-26

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1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 
8 ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 
4 ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 
2 ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 
1 ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 
0.5 ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、 
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后 
再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸 
及孔壁,輕輕晃動混勻。 
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復 
5次,拍干。 
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3。 
8.洗滌:操作同5。 
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后 
15分鐘以內進行。 
 

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