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大鼠ELISA試劑盒樣品制備方法
閱讀：254 發(fā)布時間：2020-8-3
一、細(xì)胞培養(yǎng)物上清液
1.將細(xì)胞培養(yǎng)上清移至離心管，4℃，1,500 rpm 離心 10 分鐘。
2.立即進(jìn)行上清液的分裝并于 -80℃ 保存。避免反復(fù)凍融。
二、細(xì)胞提取物
1.將細(xì)胞培養(yǎng)板放置在冰上。
2.吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷 PBS 輕輕漂洗細(xì)胞一次。
3.棄去 PBS ，向 100 mm 培養(yǎng)板加入 0.5ml 提取緩沖液。
4.收集細(xì)胞，然后移至經(jīng)過預(yù)冷的離心管中。
5.短暫渦旋后冰上孵育 15-30 分鐘
6.4℃ 13,000 rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性內(nèi)容物。
7.將上清（這里是指可溶性細(xì)胞提取物）分裝至預(yù)冷的離心管中，并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。
三、條件培養(yǎng)基
1.將細(xì)胞接種到含*（含血清）生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，使細(xì)胞增殖達(dá)到預(yù)期的融合度。
2.棄去培養(yǎng)基，用預(yù)溫 PBS 小心洗滌。重復(fù)洗滌步驟。
3.棄去 PBS 洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基。
4.孵育 1-2 天。
5.將培養(yǎng)基移至離心管，4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘。
6.立即分裝上清并于 -80℃ 保存。避免反復(fù)凍融。
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