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技術文章

小鼠ELISA試劑盒八大保存方法的各種事項

閱讀:1423          發布時間:2020-9-9

注意事項:

1.一般供給的小鼠ELISA試劑盒為無菌,無需再過濾除菌。如發現小鼠ELISA試劑盒有懸浮物,則可將小鼠ELISA試劑盒加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清。

2.需要長期保存的小鼠ELISA試劑盒有必要儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時刻切勿超過1個月。由于小鼠ELISA試劑盒結冰時體積會增加約10%,因而,小鼠ELISA試劑盒在凍入低溫冰箱前,有必要預留一定體積空間,不然易發作污染或玻璃瓶凍裂。

3.瓶裝小鼠ELISA試劑盒凍結需采用逐漸凍結法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的小鼠ELISA試劑盒放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡),使溫度與成分均一,削減沉積的發作。切勿直接將小鼠ELISA試劑盒從-20℃進入37℃凍結,這樣因溫度改變太大,容易形成蛋白質凝聚而出現沉積。

4.熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*凍結的小鼠ELISA試劑盒。加熱過程中須規矩搖晃均勻。此熱處理的意圖是使小鼠ELISA試劑盒中的補體成分(complement)滅活。除非有必要,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會形成血清沉積物顯著增多,而且還會影響小鼠ELISA試劑盒的質量。補體參與反響有: 滑潤肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發作化學趨化和活化。

5.切勿將小鼠ELISA試劑盒在37℃放置太久,不然血清會變得污濁,同時小鼠ELISA試劑盒中的有效成分會破會而影響小鼠ELISA試劑盒質量。

6.血清中的沉積物

處理與保存方法:

1. 細胞培養上清:適用于小鼠ELISA試劑盒檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6. 組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

8. 保存:如果樣品小鼠ELISA試劑盒不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

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