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其他生化試劑注意事項與步驟方法
閱讀:459 發布時間:2021-1-6其他生化試劑操作步驟 :
1.用蓋片鑷其他生化試劑將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
其他生化試劑注意事項:
1. 其他生化試劑解凍與存放:-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,每隔一段時間輕輕搖晃均勻,不可直接放入溫度較高處解凍,避免因溫度改變太大,造成蛋白質凝集而出現沉淀,血清的質量下降。若短期無法用完一瓶,建議無菌分裝,再放回冷凍,避免反復凍融。4℃長時間保存后血清中的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物質變差。
2. 其他生化試劑是否滅活:加熱可滅活血清中補體系統,在極少數情況下(培養ES細胞,平滑肌細胞時)建議滅活,在培養其余細胞時不建議滅活血清。血清滅活非常容易產生沉淀,如必須滅活請按56℃,30 min,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。
3.其他生化試劑培養基:無血清培養基在結果重復性、細胞體外分化方面有優勢,但是,血清仍然是培養液中基本的添加物,尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛后再換成無血清培養液。