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生化試劑類使用方法
閱讀：661 發布時間：2021-4-21生化試劑類作用：
1、蛋白酶K：能水解消化蛋白質，特別是與DNA結合的組蛋白，在尿素和SDS中穩定。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。
2、SDS：十二烷基硫酸鈉，溶解細胞膜上的脂類與蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜，并解離細胞中的核蛋白，SDS 還能與蛋白質結合而沉淀。
3、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內的蛋白表達等。IPTG和乳糖的結構相似，所以它和乳糖一樣，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結合，使阻遏蛋白的空間構像變化，四聚體解聚成單體，失去與操縱子特異性結合的能力，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以轉錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是，IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩定。
4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的顯色試劑，在IPTG的催化下顯藍色。常跟IPTG一起用與藍白斑篩選。
5、G418：一種抗生素，對幾乎所有的細胞都有毒性，是穩定轉染常用的選擇試劑。當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方后，則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為mRNA，從而獲得抗性產物氨基糖苷磷酸轉移酶的高效表達，使細胞獲得抗性而能在含有Ｇ418的選擇性培養基中生長。Ｇ418的這一選擇特性 ，已在基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面得以廣泛應用。
6、DMSO：二甲基亞砜。實驗室常用于作液體層析溶劑，同時用作測試物質紫外消光值上時用作參照物。能溶于所有烷烴和烯烴。
7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的細胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40。
8、NP-40：很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。
9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用。在動物細胞無血清培養中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內參和抗體稀釋液。
10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩定劑，也用于穩定毛細管電泳中的變性單股DNA。
生化試劑類使用方法：
注：所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數秒后使用。
1.樣本處理（樣本處理區）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區）
取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區。
2.加樣（樣本處理區）
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區。