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人ELISA試劑盒實驗步驟及優點
閱讀:380 發布時間:2021-5-11人ELISA試劑盒實驗步驟:
1. 以稀釋液將待檢標本做適當稀釋(預試中確定)加入包被有已知抗原的酶標板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min。
2. 棄反應液,以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。
3. 加入酶標抗體(濃度在預試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min。
4. 重復第2步。
5. 加底物(濃度在預試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min,其間不時觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。
6. 于酶標儀測定OD值,OPD用492nm測定,TMB用450nm測定。
人ELISA試劑盒優點:
(1)特異性高:進行了廣泛的非特異性排查,避免了由于交叉反應和干擾導致的實驗數據誤差。
(2)精度高:通過加標回收率和線性稀釋實驗,確保樣本值的準確性,度高于同類產品(較低的CV%)。
(3)重復性好:lot-to-lot檢測確保zui小的批間差異。
(4)可靠性強:經優化的試劑盒組分可有效的阻止假陽性和假陰性試驗結果。
(5)標準曲線:在保證數據的前提下提供較寬的檢測范圍,以滿足需求。
(6)價格低廉:*試劑,國內分裝配置,大大減少了客戶因為價格高而必須購買國產試劑盒的顧慮。
人ELISA試劑盒注意事項:
1. 每次實驗均應做陰性對照、陽性對照及空白對照(以PBS代替標本),后者為本底值,在分析實驗結果時應扣除本底值,陽性對照<陰性對照<空白對照實驗成立。
2. 一般認為小分子抗原宜用本法檢測,而大分子抗原則宜采用夾心法檢測,但具體宜采用哪種方法應根據試驗決定,本發與夾心法相比在操作上減少一步。包被抗體與酶標抗體如果分別采用單克隆抗體和多克隆抗體時,宜用單克隆抗體作為包被抗體,以多克隆抗體作為酶標抗體。
3. 血清標本中抗原濃度一般較低,故一般用原倍標本進行檢測,必要時可進行稀釋測定,但應重新摸索酶標抗原的濃度,以確保方法的靈敏性。
4. 以酶標記抗原的方法同酶標記抗體。
5. 其它注意事項同酶聯免疫間接法。