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介紹抗體的保存
閱讀：442 發(fā)布時間：2022-8-1抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年，一般情況需嚴格按照抗體說明書來進行保存。
一、抗體保存溫度和條件：
1、 抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進行分裝和保存，如果抗體體積不足50 ul，可延長離心時間至 5 分鐘，從而確保抗體全部離心下來。
2、對于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯之選。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會導致抗體的降解。
分裝成小等份可最da程度減少由凍融造成的損傷，以及從單個試劑瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需凍融一次，如有剩余，可將剩余物保存于4℃。小等份的量取決于實驗人員在實驗中通常采用的量。小等份應不小于10μl；等份越小，儲液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
抗體工作液應該當天配制當天用完，在4℃盡量不要超過1天。
3、抗體的運輸：一般選擇4℃運輸，避免了反復凍融對抗體活性的損害；如若選擇干冰運輸，收到抗體是冰凍的，分裝時解凍，會增加一次凍融的過程，所以運輸過程中盡量避免干冰運輸。
特殊抗體保存條件：
酶聯(lián)抗體：保存在4℃，避免凍存以降低或喪失酶活性；
偶聯(lián)抗體：需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存，熒光抗體對光敏感，操作時應嚴格避光；
IgG3的同型對照：保存于4℃避免凍存，反復凍融會導致抗體變性，形成多聚體；
二、抗體保存注意事項：
1、 加入甘油：對于大多數(shù)抗體，可加入50%的甘油來避免反復凍融。甘油在-20℃可降低冰點，但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃，該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點；
2、 加蛋白保護劑：蛋白在高濃度時不易降解，正如有些抗體會加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因，同時加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結合標記物。
3、加入疊氮化na：為了防止微生物污染，經(jīng)常選擇加入疊氮化na到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。但在下述情況中不能使用疊氮化na：
1）、抗體用于染色或處理活細胞，用于體內(nèi)研究。疊氮化na在抵抗微生物的同時，對其它大部分有機物也是有毒的，因為它阻斷了線粒體的 細胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem。
2）、要偶聯(lián)帶有氨基的抗體。疊氮化na會干擾任何含有氨基的偶聯(lián)，因此在進行偶聯(lián)之前，應將疊氮化na去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化na保存，但是濃度只能是0.01％。對于需要偶聯(lián)的抗體，硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化na作為保護劑。
此外，如果需要去除疊氮化na，可以通過凝膠電泳或過濾的方式（IgG 的分子量是 150kDa，疊氮化na的分子量只有65Da），使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化na從抗體中去除。