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探討抗體的分裝與保存
閱讀:245 發(fā)布時(shí)間:2022-10-8抗體(antibody)是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個(gè)*特征,該外來目標(biāo)被稱為抗原。
抗體的分裝與保存:
抗體保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。
1. 收到抗體后請?jiān)?2000rpm 離心1-5min, 將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存!
2.對絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20 ℃是*足夠的。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃ 會(huì)有更多的好處!
3. 分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,最少不要少于10ul 每份。因?yàn)榉盅b體積越小,抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。分裝可以最da 程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害,同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4 度,避免再凍起來!
4. 大部分抗體收到后4 度短暫保存1-2 周對抗體活性是沒有影響的,因蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解。所以如果抗體很快(1-2 周)會(huì)使用,推薦在4 ℃保存,這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20 ℃ 或-80 ℃。而對于抗體工作液來說最好當(dāng)天配制當(dāng)天用完。
5.為了避免反復(fù)凍融,很多抗體公司會(huì)加50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融,甘油在-20 度 會(huì)降低冰點(diǎn),這對很多抗體可能是可行的。但加入甘油的溶液不建議在-80 度保存,因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。
6.因蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解,因此部分抗體公司通過在抗體中加入BSA 等蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來提高蛋白質(zhì)濃度以達(dá)到保護(hù)抗體的目的。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
7.為了防止微生物污染,抗體溶液中一般會(huì)加入終濃度0.02% (w/v)的疊氮化na。但在一些特殊情況下,如抗體用于處理活細(xì)胞和體內(nèi)研究,以及要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體時(shí),需要除去疊氮化na。通常的去除方法有凝膠電泳和超濾法
特殊抗體的保存條件:
1. 酶聯(lián)抗體:保存在4 ℃,避免凍起來。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失。
2. 偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化na保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal(merthiolate)可以替代疊氮化na作為保護(hù)劑。
3. IgG3 的同型對照:永遠(yuǎn)保存在4 度,避免凍起來。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體。