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免疫學檢測法
閱讀：239 發布時間：2013-1-8免疫學檢測法的基本原理是細胞因子（或受體）與相應的特異性抗體（單克隆抗體或多克隆抗體）結合，通過同位素、熒光或酶等標記技術加以放大和顯示，從而定性或定量顯示細胞因子（或受體）的水平。這類方法的優點是實驗周期短，少受抑制物或相似生物池功能因子的干擾，如抗體的特異性高可區分不同型或亞型的細胞因子（如IFN），一次能檢測大量標本，易標準化。與生物學活性檢測方法相比，免疫學檢測法在許多情況下敏感性低于前者，所得結果不表示生物學活性，有的McAb只能識別重組的細胞因子，在檢測天然的細胞因子中受到限制。
免疫學檢測法多采用ELISA和RIA法，可以分為平心法、競爭法和間接法。
（一）ELISA（或RIA）平心法
根據抗體性質和特異性不同可有以下幾種不同的平心法ILISA。
1.PcAb與McAb夾心法 用純化的多克隆抗體（PcAb）包被板子，加待檢細胞因子（或可溶性受體）和標準品，上層加酶標記的McAb。有時為了增加敏感性，上層加McAb后再用酶標記第二抗體顯色。
2.McAb與PcAb夾心法 用McAb包被板子，加待檢樣品，上層加酶標記的PcAb。有時為了增加敏感性，上層加PcAb后再用釗對PcAb的酶標記抗抗體。
3.雙McAb夾心法 選擇和應用識別同一個細胞因子（或受體）分子上不同表位的兩種McAb，其中一種包被板子，另一種McAb標記酶。由于單克隆抗體親和力識別表位地勻一，從質量控制角度來看，一般比上兩種夾心法易控制。如目前已商品化檢測細胞因子（或其受體）的檢測盒大多采用雙單克隆抗體夾心法。
4.細胞、McAb夾心法 用表達IL-2R的MT-1細胞包被板子，加入待檢IL-2或標準品，上層加125I標記的McAb，根據γ計數cpm值推算出待檢IL-2含量。
（二）競爭法
有報道用況爭法檢測IL-2水平。用免抗IL-2PcAb包袱板子，同時加入125I標記的IL-2和待測IL-2，根據γ計數cpm值得知待檢IL-2對125I-IL-2與PcAb競爭結合的程度，從而推算出待測標本IL-2的含量。這種方法檢測IL-2的敏感性可達50pg/ml。
為了增加敏感性，在上述系統中可再連接上生物素，再用鏈霉親和素（streptavidin）酶標記物進行放大。此外，還可用化學發光、改進顯色底物等措施提高檢測方法的敏感性。