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撫生試劑-PEG分子治療濃度對融合率有明顯影響
閱讀:408 發布時間:2014-4-14PEG分子治療濃度對融合率有明顯影響
PEG的分子質量和濃度對融合率有明顯影響,相對分子質量在400~6000,濃度在10%~60%均可促融。但相對分子質量和濃度越大,促融率越高的同時,黏度和對細胞的毒性也越大。常用濃度為40%~50%,低于30%融合率較低,高于50%則毒性較大。實驗經驗表明,Merck公司的相對分子質量為4000的PEG促融合效果。配制方法:取PEG 2g沸水中煮30min或高壓15min,冷卻至50~60℃時加入37℃預溫的不*培養液2ml,混勻后4℃保存。
2)融合的關鍵除了無菌操作之外就是動作一定要輕柔,就像制備感受態細胞一樣,而且一定要混勻,不然在鏡下會出現成團的細胞,會影響本就不高的融合率。
3)污染的處理。由于雜交瘤細胞的培養周期長,工作量大,污染是zui需要引起高度重視的。當遇到可疑污染的培養孔,先將孔中液體抽吸丟棄,加入lmol/L NaOH數滴沖洗兩次,再加入0.2ml NaOH并換上新消毒的培養皿蓋繼續培養。如板上出現多處污染,應整板廢棄。