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多克隆抗體制備的免疫方法
閱讀：135 發(fā)布時間：2015-10-7elisa試劑盒 1) 免疫方法——免疫途徑
? 常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內(nèi)、淋巴結(jié)、腳掌等注射。
? 一般采用多點注射方法
– 常在足、掌、腋窩淋巴結(jié)周圍、背部兩側(cè)、頜下、耳后等處的皮內(nèi)或皮下。
– 皮內(nèi)易引起細胞免疫反應，有利于提高抗體的效價。
(1) 免疫方法——免疫途徑 (續(xù))
? 幾點說明：
– 大動物一般不用腹腔注射
– 顆粒抗原和使用佐劑時不能靜脈注射
– 抗原寶貴可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法，只需10～100?g抗原即可獲得較好的免疫效果。
elisa試劑盒– 皮內(nèi)注射較困難，特別是天冷時更難注入。
(2) 免疫方法——次數(shù)及間隔時間
? 次數(shù)一般為2～3次(初次免疫和加強免疫)
– 注射后，10～15天再加強注射；
– 劑量同或為的一半，用不全佐劑或不用佐劑。
? 間隔時間，一般而言，動物越大，間隔越長
– 豚鼠、大鼠為7～8天，兔子為10～15天，羊為14～28天；
– 第三次注射的間隔時間更長些，效果更好。
舉例1：家兔的免疫
? 初次免疫
– 用50～200?g Ag加入FCA，在背部皮下注射6～8點，每點0.1～0.2ml，也可肌肉內(nèi)或皮內(nèi)注射；
? 兩周后，加強免疫
– 將50～200?g Ag于PBS或FIA中，在肌肉、皮下、靜脈或腹腔內(nèi)注射；
? 抗體效價的檢測：加強免疫一周后，耳緣靜脈采血
– 抗體效價測定可用環(huán)狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴散法等方法。前者抗體效價在1:4000以上，后者在1:16以上，即可采血，取血清進一步提純。
舉例2：微量抗原淋巴結(jié)內(nèi)注射免疫家兔
? 一般選擇2.5～3.0kg的新西蘭種公兔
– 先在其兩腳墊注射*福氏佐劑0.2ml(卡介苗每兔合5mg)；
– 10天后，見胭窩淋巴結(jié)腫大，然后將抗原注射至腫大的淋巴結(jié)內(nèi)，*次注射抗原用*福氏佐劑混合乳化；
– 以后每隔20天用不*福氏佐劑乳化抗原，以同樣方法加強2次，各次注射的抗原均為25～50?g；
– 末次注射兩周后兔耳放血測價 (可達1:128)。
舉例3：豚鼠和大鼠的免疫
? 初次免疫
– 用10～100?g Ag加入FCA，在背部皮內(nèi)注射4～6點，每點 0.lml，也可肌肉內(nèi)或皮下注射；
? 加強免疫
–elisa試劑盒 每隔 7～8天，將10～50?g Ag于 PBS或FIA中。在肌肉、皮下或靜脈注射；
? 抗體效價的檢測
(3) 免疫劑量
? 抗原性強的抗原量應小，過大反會引起免疫抑制；
? 免疫周期長的動物可少量多次注射，短的可大量少次。
(3) 免疫劑量 (續(xù))
? 各種動物免疫抗原劑量和加強免疫的劑量
(4) 抗體效價的檢測
多采免疫雙向擴散法