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人胰島細胞抗體ELISA試劑操作分析
閱讀:209 發布時間:2016-4-1ELISA試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
建議使用的實驗方案
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的ICA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的ICA含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍:0-40mIU/ml
4、敏感度: 0.1 mIU/ml
SEPT12 細胞分化蛋白SEPT12抗體
SNIP1 Smad核相互作用蛋白1抗體
Syntaxin 6 突觸融合蛋白6抗體
Sprouty1 軟脂酰化磷蛋白Sprouty1抗體
SH3TC2 脫髓鞘相關蛋白SH3TC2N抗體
SHANK2 富含脯氨酸突觸相關蛋白SHANK2抗體
SHARPIN 線性泛素鏈相關蛋白SHARPIN抗體
SAMD7 SAMD7蛋白抗體
SAMD3 SAMD3蛋白抗體
Syntrophin gamma 2 肌蛋白結合蛋白γ2抗體
SOX22 核轉錄因子SOX22抗體
SOX4 核轉錄因子SOX4抗體
SUFU/Suppressor of Fused 抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體
SNAIL Snail蛋白抗體
SARP1 分泌細胞凋亡相關蛋白1抗體
SMARCD3 肌動蛋白依賴染色質調控因子SMARCD3蛋白抗體
SLC26 線粒體載體腺嘌呤核苷酸轉運蛋白6抗體
SODD Bcl2結合抗凋亡蛋白4抗體
C10orf27 第10號染色體開放閱讀框27抗體
5-HTR2A 5-羥色胺受體2A抗體
5 lipoxygenase 5-脂氧合酶抗體