化工儀器網
技術文章
豬細小病毒（CPV）ELISA試劑盒技術分析
閱讀：138 發布時間：2016-4-6本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中豬細小病毒CPV。用純化的豬細小病毒（CPV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中細小病毒（CPV）抗原相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的細小病毒（CPV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬細小病毒（CPV）的存在與否。ELISA試劑盒
標本要求：
1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測
2．豬細小病毒CPV標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，但應避免反復凍融。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標準品）50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．豬細小病毒CPV所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
BNC2 堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體
BCL7C B細胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體
BSCL2 先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體（常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17）
BTG1 B細胞遷移基因1抗體
BEAN1 脊髓小腦共濟失調蛋白BEAN1抗體
B7-H6 B7H6蛋白抗體
BOb-1 B細胞特異性轉錄因子抗體
BIN1 橋連整合因子蛋白抗體
BADH2 BADH2抗體(水稻)
BCHE(1E8) 丁酰膽堿酯酶單克隆抗體
phospho-beta catenin (Tyr142) 磷酸化β 連環素蛋白抗體