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技術文章

細胞感染方法

閱讀:119          發布時間:2016-7-1

(一)細胞準備

將狀態良好的目的細胞接種到24孔板,使細胞濃度為1×105/ml細胞,接種細胞數量因細胞的生長速度而略有不同,一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介于50%至70%之間。ELISA試劑盒

(二)病毒感染

1.感染細胞*佳MOI的測定MOI(MultiplicityofInfection,感染復數)是指每個細胞感染的病毒數,通常MOI越高,病毒整合到染色體的數量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞,比如Hela、293細胞,MOI=1~3時,80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞,比如原代細胞,感染效率較低。需要進行MOI梯度摸索實驗,選擇適合的MOI進行實驗。

2.感染步驟

按實驗需要將細胞鋪板(比如12孔板);細胞數以第2天密度約50%為宜;37℃培養。

對于Polybrene可施加的細胞:準備*培養基和Polybrene混合物,Polybrene終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養基并添加0.5mlPolybrene/培養基混合物于每孔中(適用于24孔板,其他孔板請相應調整體)。

對于不適用Polybrene的細胞,以上步驟省略,直接進入下面步驟:

感染前,從冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒,吸去細胞原有培養基,將病毒原液加入細胞中,輕輕8字混勻。感染后第二天(約12小時),吸去含病毒的培養液,換上新鮮的*培養液,繼續37℃培養。感染后48小時,對于帶GFP報告基因的病毒,可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達效率,對于攜帶Puromycin抗性基因的病毒,換上含適當濃度的Puromycin的新鮮*培養液,篩選穩定轉導的細胞株。

LAS2    肺腺瘤易感蛋白2抗體
phospho-LEO1(Ser551)    磷酸化RNA聚合酶相關蛋白LEO1抗體
LATS2    腫瘤抑制基因LATS2抗體
phospho-LSP1 (Ser204)    磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體
phospho-LATS2 (Ser83)    磷酸化腫瘤抑制基因LATS2抗體
phospho-LSP1 (Ser252)    磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體
LSP1    白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體
LZTFL1    亮氨酸拉鏈轉錄因子樣1抗體
Laminin B2 gamma 1    層粘連蛋白B2γ1抗體
Phospho-LAT (Tyr161)    磷酸化T細胞活化連接蛋白抗體
Phospho-LAT (Tyr200)    磷酸化T細胞活化連接蛋白抗體
LRP1/CD91    低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體
LPCAT2    磷脂酰基轉移酶2抗體

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