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技術文章

免疫技術用熒光染料

閱讀:164          發布時間:2016-8-5

    ELISA試劑盒在流式細胞計的應用中,熒光色素是關鍵試劑,免疫熒光的檢測,對試劑的要求尤其具有特殊性。
     對熒光染料的要求1、染料必須在理想的激光光源的某一波長有強烈吸收;2、由于免疫熒光測定,信號的強度是主要限制因素,故要求染料應有較高的量子效應3、激發光和發射光之間要有較大的波長區別,以便使熒光能與激發光源所造成的背景區別開來4、便于同抗體和其他蛋白偶聯,又不影響其熒光及抗體的特異性。
熒光染料  常見者見表。其中FITC已為國內免疫界通用,此外不做介紹。當前國內常用的商品化的染料類是藻膽蛋白(Ohycobili protein)是來自光合青色細菌(photosyntheric  cyanobacteria)和紅色藻類(Red algae)的自然熒光色素。其基本類型為:藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)、藻青蛋白(Phycocyanin)及別藻青蛋白(Allophycocyanin,APC),其分子結構基本是幾個帶有開鏈四吡咯色基因的多肽混合物,很適合標記抗體,它們有以下特點:可以在廣泛的波長下有效地激發;每個分子都帶有許多產生高激發系數的發光色基團;激發光、發射光易鑒別(Stokes位移大);易溶于水,發出的熒光不受pH影響,因而不易受生物因素影響而淬滅。這類熒光色素的代表是藻紅蛋白。目前,盡管應用者較多,但其標記困難及結合物易形成素脫落,保存時間短等缺點,也影響其推廣,人們正在尋找新的熒光染料。為了測定細胞表面的多種標記,還應考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求;1、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯,該色素可被單波長光激發,并能通過特殊的發射光區別開;或用不同激發波長來激發,發射光可通過光譜的差異、特殊發射光或發射時間不同來區別。2、結合抗體的色素不干擾抗體反應的特異性,或同一實驗中其他色素的特性。3、適用一步、二步、三步染色法,加適當對照組能克服試劑間的干擾。ELISA試劑盒
    為了測定細胞表面的多種標記,還應考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求;1、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯,該色素可被單波長光激發,并能通過特殊的發射光區別開;或用不同激發波長來激發,發射光可通過光譜的差異、特殊發射光或發射時間不同來區別。2、結合抗體的色素不干擾抗體反應的特異性,或同一實驗中其他色素的特性。3、適用一步、二步、三步染色法,加適當對照組能克服試劑間的干擾。

MTCH1    細胞增殖誘導蛋白60(早老素相關蛋白)
MTCH2    線粒體載體同源蛋白2抗體
MTFR1    線粒體裂變調節蛋白1抗體
MTP18    線粒體蛋白18抗體
MICS1    生長激素誘導跨膜蛋白抗體(源性蛋白2)
MFF    線粒體裂變因子MFF抗體
Mouse serum albumin    小鼠血清白蛋白抗體

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