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CRISPR技術助力真核細胞轉錄調控研究
閱讀:186 發布時間:2013-10-10提 供 商 | 上海撫生實業有限公司 | 資料大小 | 14.2KB |
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CRISPR技術助力真核細胞轉錄調控研究CRISPRs 全稱為規律成簇間隔短回文重復(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats),這是一類廣泛分布于細菌和古菌基因組中的重復結構。CRISPR 與一系列相關蛋白、前導序列一起,能為原核生物提供對抗噬菌體等外源基因的獲得性免疫能力。
日前,加州大學舊金山分校,伯克利分校等機構的科學家們指出 CRISPR 技術可以用于真核細胞轉錄調控研究, CRISPR 干擾(CRISPRi)可以作為真核細胞基因表達調控的一種通用工具。
此前這一研究組發現當缺失核酸內切酶活性的 Cas9 與一種導向 RNA 共表達時候,會產生一種 DNA 識別復合物,這種復合物能特異性干擾轉錄延伸, RNA 聚合酶結合,或轉錄因子結合。研究人員將這個系統稱為 CRISPR 干擾(CRISPRi ),并指出這一系統能有效抑制大腸桿菌中靶向基因的表達,并且不會出現脫靶效應。而且利用 CRISPRi ,還可以同時抑制多個靶基因,這種作用也是可逆。
在這一基礎上,研究人員進一步發現在不同的調控功能元件的效應位點,加入 dCas9 ,能促進其穩定和有效轉錄的抑制或激活,這一點在人類和酵母細胞中都得到了證實。
同時將 dCas9 耦合到轉錄抑制結構域還能極大的增強多個內源性基因的表達沉默。此外研究人員還利用 RNA -seq 分析表明, CRISPR 干擾( CRISPRi )介導的轉錄抑制特異性很高。
這些研究數據均表明,研究人員建立的 CRISPR 系統可以作為一個模塊化,靈活的 DNA 結合平臺,用于針對靶向 DNA 序列蛋白召集,這也表明 CRISPRi 可以作為真核細胞基因表達調控的一種通用工具。
此前,懷特海德生物醫學研究所的科學家在《細胞》(Cell)雜志上發表的一項研究成果將再次*改變遺傳工程動物模型的構建方式,甚至有可能重新定義哪些物種可作為模式生物。這是*次利用這種稱作CRISPR/Cas的系統,在一個多細胞生物體內改變多個基因。