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自動(dòng)化的微流控芯片系統(tǒng)在單細(xì)胞中檢測(cè)MicroRNA的異質(zhì)性
閱讀：231 發(fā)布時(shí)間：2013-10-12| 提 供 商 | 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 10.8KB |
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自動(dòng)化的微流控芯片系統(tǒng)在單細(xì)胞中檢測(cè)MicroRNA的異質(zhì)性
單細(xì)胞自動(dòng)制備系統(tǒng)使用Life Technologies 開(kāi)發(fā)的試劑和實(shí)驗(yàn)方法（“Single-cell MicroRNA expression analysis”），對(duì)單細(xì)胞中的miRNA轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行目標(biāo)特異性擴(kuò)增（STA）。從將細(xì)胞懸液加至C1芯片到完成數(shù)據(jù)分析的整個(gè)流程，可以在不到24小時(shí)內(nèi)完成。
單細(xì)胞懸液（200-1000個(gè)細(xì)胞）被加入C1 IFC芯片的細(xì)胞進(jìn)樣孔。使用來(lái)自Single Cell-to-Ct™試劑盒（Life Technologies）的裂解和預(yù)擴(kuò)增試劑，以及來(lái)自TaqMan® MicroRNA Reverse Transcription 試劑盒（Life Technologies）的逆轉(zhuǎn)錄試劑，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄（使用Megaplex™ RT pool）和預(yù)擴(kuò)增（使用Megaplex™ PreAmp pool），以便可以檢測(cè)每個(gè)單細(xì)胞中多達(dá)380種miRNA的表達(dá)。C1 IFC捕獲單細(xì)胞，然后沖洗，裂解，在反應(yīng)倉(cāng)平行對(duì)每個(gè)單細(xì)胞的miRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和預(yù)擴(kuò)增。96個(gè)預(yù)擴(kuò)增過(guò)的樣本然后被導(dǎo)出，使用Biomark HD系統(tǒng)在一塊96.96動(dòng)態(tài)芯片運(yùn)行，研究每個(gè)樣本中多達(dá)96種miRNA的表達(dá)。
對(duì)從iPS，NPC和成熟神經(jīng)元（HN）獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行非監(jiān)督式聚類分析，可以清楚的將HN細(xì)胞從iPS和NPC細(xì)胞區(qū)分開(kāi)，同時(shí)也揭示了每類細(xì)胞中存在的亞群。miR-9更頻繁且更高水平的在成熟神經(jīng)元（HN）中表達(dá)。
對(duì)從iPS，NPC和成熟神經(jīng)元（HN）獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行非監(jiān)督式聚類分析，可以清楚的將HN細(xì)胞從iPS和NPC細(xì)胞區(qū)分開(kāi)，同時(shí)也揭示了每類細(xì)胞中存在的亞群。miR-9更頻繁且更高水平的在成熟神經(jīng)元（HN）中表達(dá)。
C1 miRNA STA實(shí)驗(yàn)方案使用了Life Technologies為miRNA優(yōu)化過(guò)的試劑。特別的，Megaplex™ RT及PreAmp pool可以從C1 IFC上每個(gè)單細(xì)胞獲得多達(dá)380種不同miRNA的cDNA。使用Biomark系統(tǒng)，在96.96 GE動(dòng)態(tài)芯片可以讀出表達(dá)類型。 對(duì)來(lái)自不同類型細(xì)胞的數(shù)據(jù)進(jìn)行非監(jiān)督式聚類分析及PCA分析，揭示了不同類型細(xì)胞之間、或者同一類型細(xì)胞中miRNA表達(dá)類型的差異