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  人可溶性Endoglin ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用    

試驗原理：
sENG試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知sENG濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將sENG和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中sENG的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：160ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（4.0ml） 1瓶（2.0ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗sENG抗體 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

 人可溶性Endoglin ELISA 檢測試劑盒自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
160 ng/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
80 ng/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40 ng/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 ng/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 ng/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0 ng/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

 人可溶性Endoglin ELISA 檢測試劑盒建議使用的實驗方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml） 
A 160 160 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 80 80 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的sENG標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的sENG含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-160ng/ml

4、敏感度： 1.0 ng/ml

豚鼠肝細(xì)胞生長因子（HGF）ELISA試劑盒 guinea pig hepatocyte growth factor,HGF ELISA試劑盒
豚鼠γ干擾素（IFN-γ）ELISA試劑盒 guinea pig Interferon γ ,IFN-γ ELISA試劑盒
豚鼠端粒酶（TE）ELISA試劑盒  guinea pig omerase,TE ELISA試劑盒
豚鼠促卵泡素（FSH）ELISA試劑盒 guinea pig follicle-stimulating hormone,FSH ELISA試劑盒
豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白（iFABP）ELISA試劑盒 guinea pig intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA試劑盒
豚鼠表皮生長因子（EGF）ELISA試劑盒  Guinea pig Epidermal growth factor,EGF ELISA試劑盒
豚鼠白三烯B4（LTB4）ELISA試劑盒  guinea pig Leukotriene B4,LT-B4 ELISA試劑盒
豚鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒  guinea pig Interleukin 6,IL-6 ELISA試劑盒
豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶（LPO）ELISA試劑盒  Guinea Pig lipid peroxlde,LPO ELISA試劑盒
豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）ELISA試劑盒  Guinea Pig advanced glycation end products,AGEs ELISA試劑盒
豚鼠白介素1受體拮抗劑（IL1Ra）ELISA試劑盒  Guinea Pig Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA試劑盒
豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4（MCP-4/CCL13）ELISA試劑盒  Guinea Pig monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA試劑盒
豬低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）ELISA試劑盒  Procine hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA試劑盒
豬鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運載體1（GSLT1）ELISA試劑盒 Porcine sodium-glucose cotransporter 1,GSLT1 ELISA試劑盒
豬松弛肽/松弛素（RLN）ELISA試劑盒 Porcine Relaxin,RLN ELISA試劑盒
豬流感病毒A（FLU A）ELISA試劑盒 Porcine Influenza viruses A,FLU A ELISA試劑盒
豬孕激素/孕酮（PROG）ELISA試劑盒 Porcine Progesterone,PROG ELISA試劑盒
豬白介素-5（IL-5）ELISA試劑盒 Porcine Interleukin 5,IL-5 ELISA試劑盒
豬層連蛋白/板層素（LN）ELISA試劑盒 Porcine Laminin,LN ELISA試劑盒
豬Ⅱ型膠原（Col Ⅱ） ELISA試劑盒  Porcine Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA試劑盒
豬可溶性E選擇素（sE-selectin）ELISA試劑盒  Porcine soluble E-selectin,sE-selectin ELISA試劑盒
豬白介素13（IL-13）ELISA試劑盒  Porcine Interleukin 13,IL-13 ELISA試劑盒
豬轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGF-β2）ELISA試劑盒  Porcine Transforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA試劑盒
豬E選擇素（E-Selectin/CD62E）ELISA試劑盒 Porcine E-Selectin ELISA試劑盒
豬褪黑素（MT）ELISA試劑盒 Porcine Melatonin,MT ELISA試劑盒
豬白介素12（IL-12/P40）ELISA試劑盒 Porcine Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA試劑盒