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細(xì)胞增殖與IL-2量呈正比
閱讀：257 發(fā)布時(shí)間：2014-8-5這是一類利用細(xì)胞因子的基因探針檢測(cè)特定細(xì)胞因子基因表達(dá)的技術(shù)。目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化，故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測(cè)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的方法多種多樣，常使用斑點(diǎn)雜交、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR，細(xì)胞或組織原位雜交等。實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測(cè)物（提取的mRNA樣品或細(xì)胞/組織標(biāo)本）。
核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物（如生物素、等）標(biāo)記并與目的基因互補(bǔ)的DNA段或單鏈DNA、RNA。根據(jù)其來(lái)源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點(diǎn)雜交及Northern blot，而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化，以cDNA探針為例主要包括：①質(zhì)粒DNA的提取；②靶DN段的分離；③靶DN段標(biāo)記；④待測(cè)樣品mrna的提取；⑤標(biāo)記cDNA探針對(duì)待檢樣品的雜交；⑥放射自顯影或顯色分析。近年來(lái)出現(xiàn)的RT-PCR檢測(cè)特異性mRNA的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn)，甚至從1～10個(gè)細(xì)胞中就可檢出其中的特異mRNA。
1．細(xì)胞增殖法
許多細(xì)胞因子具有細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性，特別是白細(xì)胞介素，如IL-2激t細(xì)胞生長(zhǎng)、IL-3激肥大細(xì)胞生長(zhǎng)、IL-6激漿細(xì)胞生長(zhǎng)等。利用這一特性，現(xiàn)已篩選出一些對(duì)特定細(xì)胞因子起反應(yīng)的細(xì)胞，并建立了只依賴于某種因子的細(xì)胞系，即依賴細(xì)胞株（簡(jiǎn)稱依賴株）。這些依賴株在通常情況下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養(yǎng)基中很快死亡，而加入IL-2后則可右體外長(zhǎng)期培養(yǎng)。在一定濃度范圍內(nèi)，因此通過(guò)測(cè)定細(xì)胞增殖情況（如使用3h-tdr摻入法、MTT法等）鑒定IL-2的含量。除依賴株外，還有一些短期培養(yǎng)的細(xì)胞，如胸腺細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、促有絲分裂原激后的淋巴母細(xì)胞等，均可作為靶細(xì)胞來(lái)測(cè)定某種細(xì)胞因子活性。
2．靶細(xì)胞殺傷法
是根據(jù)某些細(xì)胞因子（如TNF）能在體外殺傷靶細(xì)胞而設(shè)計(jì)的檢測(cè)方法。通常靶細(xì)胞多選擇體外長(zhǎng)期傳代的腫瘤細(xì)胞株，利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細(xì)胞的殺傷率。
目前，幾乎所有常見細(xì)胞因子的檢測(cè)試劑盒均有商品供應(yīng)。此外還可利用酶標(biāo)或熒光標(biāo)記的抗細(xì)胞因子單克隆抗體，原位檢測(cè)因子在細(xì)胞內(nèi)的合成及分布情況，如近來(lái)來(lái)發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞內(nèi)染色法和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISPOT）技術(shù)等。免疫學(xué)檢測(cè)法可直接測(cè)定樣品中特定細(xì)胞因子的含量（用ng/ml表示），為大規(guī)模檢測(cè)臨床病人血清中細(xì)胞因子的含量提供了方便。本法僅測(cè)定細(xì)胞因子的抗原性，與該因子活性不一定相平行，因此要了解細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng)，必須結(jié)合生物學(xué)檢測(cè)法。