人附睪成纖維細胞的相關產品：大鼠原代結腸神經元細胞長根奧德蘑Oudemansiella radicata兔胃成纖維細胞樺癌褐孔菌Fuscoporia obliqua人胃成纖維細胞簇生沿絲傘Naematoloma fasciculare人腎上腺包膜成纖維細胞亞黑管孔菌Bjerkandera fumosa

一、細胞基本屬性：

包被條件： 

培養基：原代成纖維細胞培養體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養條件：氣相：  空氣，95%；CO2 ，5%

原代細胞實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。

公司正在出售的產品：
人胚腎上皮細胞

人胚腎上皮包裝細胞
滋養層上皮細胞
人正常鱗狀上皮細胞
大鼠胰島素瘤細胞
人肺扁平上皮癌細胞
低轉移肺癌細胞
肺癌細胞
人胃腸間質瘤細胞
耐長春新堿胃腺癌細胞
人胃腺癌細胞
人口腔鱗癌細胞
舌癌細胞
喉癌細胞
黑色素瘤細胞
Geobacillus sp.地芽孢桿菌
Bacillus tashidiensis塔什店芽孢桿菌
Rhizobium tibeticum西藏根瘤菌
Deinococcus gobiensis戈壁奇異球菌
Nocardioides marinus海類諾卡氏菌
Nocardioides panacihumi人參田地類諾卡氏菌
Rhodobacter sp.紅細菌
Vibrio alginolyticus解藻酸弧菌
Arthrobacter nitroguaiacolicus硝基愈創木膠節桿菌
Lactobacillus sakei subsp. sakei清酒乳桿菌清酒亞種
人附睪成纖維細胞Gluconacetobacter liquefaciens液化葡糖酸醋桿菌
Gluconobacter oxydans氧化葡糖桿菌
Gluconacetobacter hansenii漢氏葡糖酸醋桿菌

Clostridium acetobutylicum丙酮丁酸梭菌
Sphingomonas sanxangenens胞外多聚物鞘氨醇單胞菌

原代細胞使用方法：

是一種貼壁培養細胞，細胞形態呈上皮樣，多角形細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；

3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；

4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。

5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。